本方案可对微量的NKT细胞进行鉴定和定量分析。应采取有效措施阻断非特异染色，以获得可靠的实验结果。本实验联用两种单抗以确保结果的特异性。 作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」
本法可从几毫升的外周血中分离和扩增 N K T 细 胞（ 1 0 000 N K T 细胞），浓缩白 细 胞（分离血小板时的副产品）也可作为 N K T 细胞的来源。
3 . 加入荧光素标记的抗 V a 2 4 单抗和另一种荧光素标记的抗 V p i l 单 抗（或标记的抗6B 11 单抗，推荐使用），终浓度均为 IOiU g A n U 冰 浴 30 min。同时，取部分细胞加入相应的同型对照抗体。
5.—周后，每孔加入 0.1 ml T 细 胞 克 隆 培 养 基（不 含 P H A -P )。显微镜下观察细胞生长情况： 10〜M d 后 ，阳性孔中会出现一个或多个母细胞克隆（母细胞 星空体育登录入口 星空体育在线官网圆 形 ，体积较大，每个克隆细胞数超过 100 个）。
6 . 根据克隆生长情况，每 隔 2〜3d 用 T 细胞克隆培养基传代。如果用自体血清进行 T克隆，当细胞扩增后，每次传代时培养基中增加 2 5 % 的异体人血清或 F B S ，直至完全取代自体血清。
5 . 第 5 天 ，用新鲜培养基进行半量换液，维持各细胞因子浓度为 50U /m l 。
6 . 第 1 0 天 ，在显微镜下观察 T 细胞克隆扩增情况。如果母细胞密度较高且培养基颜色变黄，用含细胞因子的扩增培养基将细胞进行 1 : 2 传代。对于生长旺盛的细胞，可每 隔 2〜3d 进行细胞传代。
经 过 2 周左右时间细胞可扩增约 1000 倍 。在无追加刺激的情况下，细胞可继续培养几周。