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NK细胞的体外扩增策略协助NK细胞临床应用
发布:2024-05-13 17:48:58 浏览:

  NK细胞无需预先致敏,便可通过快速激活一系列NK激活受体来识别和裂解肿瘤细胞。此外,异体NK细胞在造血干细胞移植(HSCT)中识别和杀伤急性髓性白血病(AML)中的作用,亦促进了基于自体/异体NK细胞,甚至是基因工程改造的NK细胞(如CAR NK),应用在高危癌症患者的免疫细胞治疗的开发;目前也已在1/2期临床试验中。随着人们对NK细胞研究不断深入,基于NK细胞的免疫治疗在新的抗肿瘤治疗策略中具有重要意义。

NK细胞的体外扩增策略协助NK细胞临床应用(图1)

  以NK细胞为基础的过继性免疫治疗需要大量的细胞,其应用范围为患者每公斤体重需1×106—8×107CD3-CD56+NK细胞 (即一个80kg的成人需要至少8x107NK细胞,并需多次回输)。此外,NK细胞在外周血中所占比例很低(5-15%),因此在用于过继性免疫治疗之前,有必要对其进行扩增。

  自体或异体NK细胞用于移植,可从不同来源获得细胞:外周血单个核细胞(PBMC)、脐带血(UCB)、骨髓(BM)、诱导多能干细胞(iPSC)和细胞系。大量高纯度、高活性的NK细胞的扩增是其用于治疗的关键因素。NK细胞扩增可以纯化或富集的NK细胞抑或从单采血产品(如PBMCs)为起始材料。随后,扩增的NK细胞在最后阶段被纯化,通常是通过磁分选(CliniMACS®systems)来消除其他免疫细胞,如T或B细胞。这在异体造血干细胞移植至关重要,供者的异基因反应性T淋巴细胞会对患者产生副作用,如GvHD。因此,安全高效的生产方法是获得大量功能性NK细胞的关键,为NK研究和临床应用做好准备。

  体外扩增NK细胞,使用细胞因子是一种有效扩增NK细胞并提高其活性的方法,因为众所周知,它们介导NK细胞的增殖和活化。大量的细胞因子如IL-2、IL-15、IL-12、IL-18、IL-21和I型干扰素已被相继用于NK细胞的体外扩增。

  IL-2可在短时间(24小时)内促进NK细胞的存活、激活和提高细胞毒性。IL-2刺激PBMCs可导致淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine-activated killer, LAK)数量的增加,LAK由NK细胞和T细胞组成,对自体肿瘤细胞具有较高的杀伤能力。

  IL-2和IL-15联合应用可促进NK细胞的增殖和活性,有利于NK细胞的激活。且只有IL-15可以维持NK细胞在输注患者后的细胞溶解功能。IL-2和IL-15诱导NK细胞活化受体NKG2D、NKp44、NKp30和NKp46的表达,提高其对肿瘤细胞株的细胞毒性。IL-12也用于体外NK细胞培养,刺激NK细胞产生IFN-γ。IL-12、IL-15和IL-18联合作用可诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞(Cytokine-induced memory-like, CIML),是一种寿命长、细胞毒性高、分泌IFN-γ的细胞。CIML-NK细胞已在小鼠肿瘤模型中进行过继免疫治疗,并显示出抗黑色素星空体育登录入口 星空体育在线官网瘤和淋巴瘤的良好效果。

  NK细胞的扩增需要多种生存、增殖和激活信号。因此,来自辅助细胞 (accessory cell)的刺激可以用来增强NK细胞的扩增,获得足够的细胞用于后续NK细胞治疗。过去文献显示,起始材料使用PBMC比使用纯化的NK细胞进行体外扩增,可获的更多数量的NK细胞,这表明PBMC中的其他非NK细胞为NK细胞的增殖提供了额外辅助。NK细胞与自体非NK细胞或生长失活的滋养细胞(如PBMC 或K562细胞系)共培养也也是一种策略,对NK细胞的活化和扩增有显著影响。尽管细胞系(ex. K562)共培养帮助NK细胞扩增取得了显著的效果,但这些用肿瘤细胞系进行扩增的方法需要建立一个主细胞库 (master cell bank),并遵循GMP严格的规定操作,以确保其在过继免疫治疗中的安全使用。

  联合使用IL-2(500u/ml)和抗CD3单抗亦可幫助扩增健康供者和多发性骨髓瘤患者PBMC中NK细胞。值得注意的是,从PBMCs开始培养会导致CD3+T和NKT样(CD3+CD56+)细胞的扩增。因此,基于异体移星空体育登录入口 星空体育在线官网植可能引起的T细胞介导的同种异体反应性,通过磁分选(CliniMACS®systems)来消除其他免疫细胞,以获得高纯度的NK细胞,是NK细胞治疗临床应用的关键。

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