将状态良好的细胞接种到24孔板上，使细胞的密度达到1*105/ML。一般是保证第二天进行病毒转染时细胞的汇合率在50%至70%之间。
Polybrene是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率。
Polybrene是具有一定的细胞毒性的，一般以1-10ug/ml 的范围筛选合适的浓度，以24h内对细胞无明显的毒性反应为最佳，可参考文献进行摸索，最常用的工作浓度为6-8ug/ml。
MOI (multiplicity of infection, 感染复数)是指每个细胞感染的病毒颗粒数，MOI值越高，病毒整合到染色体的细胞数量以及mu7didanbai的表达量越高，对于分裂活跃的细胞，例如细胞系，MOI=1-3时，80%以上的细胞均可表达目的基因。
将细胞铺板（以24孔板为例），细胞数与第二天密度为50%为宜，37度培养过夜。
对于使用polybrene的细胞：准备完全培养基和polybrene的混合物，polybrene终浓度为8ug/ml。移去培养基并添加0.5ml的混合物。
感染前，从冰箱取出病毒并在冰上慢慢融化，吸取细胞原有的培养基，加入1/2的体积的培养基（培养基为混有病毒原液的新鲜培养基）。37度感染4h，4h后补足另一半的培养基。
感染后第二天（24h），吸去含有病毒的培养基，换上新鲜的培养基，继续37度培养，在培养24h，对于带有GFP的可在显微镜下观察，对于携带puromycin抗性基因的病毒，换上含有适当浓度puromycin的新鲜完全培养基，筛选出稳定转染的细胞株。
Puromycin推荐使用浓度1-10ug/ml (293系列，3；Hel星空体育官方入口 星空体育官网a，3)，每2-3天更换一次含有puromycin的完全培养基，至到没有感染病毒的对照组细胞全部被杀死，即可进行以下两步操作。
将感染并筛选后的细胞进行传代，并继续施加puromycin进行维持性筛选培养，连续培养并传代3代后，冻存保种细胞
将感染并筛选后的细胞挑取至少5个克隆进行细胞扩增，并继续施加puromyci星空体育官方入口 星空体育官网n进行维持性筛选培养。扩增完成后，WB或者qpcr检测目的蛋白或基因的表达，挑取表达量适中的稳定的细胞株，连续筛选并传代3代后，冻存保种稳定细胞株。
将转染LV的细胞，用胰酶消化下来，换上人工脑脊液，注射到小鼠的海马区域内，48h之后灌注，观察
请问，在小鼠海马区注射或侧脑室注射时，是可以直接用慢病毒去注射吗？还是用转染慢病毒的细胞和人工脑脊液混合物注射？小鼠慢病毒注射可以稳定感染吗？
老师，有个问题请教一下。我用flag标记的目的基因进行腺病毒转染之后想用wb检测一下基因表达，我看文献中不但检测了目的蛋白和flag蛋白复合体，还特意单独检测了flag蛋白。请问单独检测flag蛋白有什么意义么。单独flag蛋白条带过重是说明什么呢？谢谢！
1.请问促转染剂Polybrene细胞铺板的时候就加吗，可以等到次日加慢病毒的时候再一起加吗？
2.想要检测基因或蛋白的表达，时间选择是在筛选出稳转株后还是慢病毒转染后48h？因为查文献说慢病毒转染后48H基因和蛋白的表达量最高。
你好！请问293T细胞的培养基是高糖，但是我的细胞所用的培养基是F12，转染之前我该用高糖还是直接换成F12来培养293T细胞呢？
请问嘌呤霉素的浓度从始至终都是一个浓度吗，还是初次筛选后，嘌呤霉素的浓度逐渐降低？
请问普通细胞系会对puromycin 逐渐产生抗性不？我用高浓度puro筛，对照组大部分都可以杀死，然后剩下零星视野里十多个细胞就一直没飘起来，降低浓度后竟然慢慢开始增值了，请问是怎么回事