SRT-1720,EX527一定要应用在白血病细胞株起作用的浓度方可比较对293T细胞和白血病细胞株的不同影响,请重复实验。
实验目的:检测SRT-1720/EX527刺激293T细胞后对细胞增殖的影响
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞至96孔板。
2、设置4个细胞浓度梯度:0,2000,4000,8000,每组4个复孔。
3、接种后培养24小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养4小时后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)
1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5%CO2的条件下)。
4、每孔加入10μLCCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
图二、3umSRT1720刺激293T细胞后的细胞增殖曲线。该曲线呈S形,符合细胞正常生长情况。
图三、100umEX527刺激293T细胞后的细胞增殖曲线。该曲线星空体育 星空体育平台前部分呈S形,符合细胞正常生长情况,但在进入对数期之后曲线有下滑,之后进入平台期。
SRT1720为SIRT1特异性活化剂,在前期实验中对白血病细胞株的生长表现出抑制作用,此次实验中SRT1720对正常细胞(293T)的生长无明显抑制作用。暗示SIRT1的活化对正常细胞的生长可能无明显影响。
小剂量EX527为SIRT1特异性抑制剂,在前期实验中大剂量EX527对白血病细胞株的生长表现出抑制作用,而小剂量EX527无此效应,此次实验中大剂量EX527对正常细胞(293T)的生长可能有轻度抑制作用。但不能以一星空体育 星空体育平台次实验结果做出肯定的结论,该实验还需重复。
