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1、培养对象：MMSC细胞规模：1000L细胞大规模培养技术复苏1.把冻存管取出来，立即投入37水浴锅中，轻微摇动。液体融化1分钟，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中，1000转离心6分钟。3.把上清液倒掉，加1ml新鲜培养液把细胞悬浮起来。转移到培养瓶中，加新鲜培养液混匀，静置3分钟，镜检。4.标好细胞种类和日期、培养人名字，放到CO2培养箱中培养。种子细胞扩大培养过程1.25cm方瓶 2.75cm方瓶 3.7.5l细胞罐 4.40l细胞罐 5.120l细胞罐 6.500l细胞罐 7.1200l细胞罐接种密度5万50万/ml之间全程严格无菌
2、操作，培养物无微生物污染和其他细胞污染培养设备与培养形式贴壁培养设备：搅拌反应器、中空纤维反应器、玻璃珠床反应器等。培养形式：分批式培养，流加式培养，半连续式培养，连续式培养。老师操作步骤 老师操作的步骤:从二氧化碳培养箱中取25立方厘米的培瓶,镜检,细胞生长良好,在超净工作台用酒精棉球擦拭瓶口,倒出培养液, 洗2次,倒入胰蛋白酶,放入培养箱中1分钟,在倒入新配置的培养液，分装在4个离心管中。在另外4个管中各倒入新配置的培养液10毫升。注意事项(1)超净工作台的准备:实验所需器材与无菌器皿放置,开紫外,通风。(2)镜检:观察细胞的生长密度,有无染菌。（3）手消毒，培养瓶口用酒精擦拭，用 洗时，吹打。（4）胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，从而使粘连的细胞脱壁悬浮。胰蛋白酶处理时间过长对细胞有毒性作用，最适温度37摄氏度。（5）培养液用前摇匀。2.B2组的操作步骤 A细胞计数,结果为8万每毫升。 B把10毫升的培养液平均放入6孔,把3毫升细胞液平均放入6孔,再混匀。镜检，标记，放入培养箱培养。（星期一下午3点) C星期二，三镜检观察，细胞不断生长，星期四发现细胞染菌。
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