本发明涉及生物，具体涉及细胞培养，尤其涉及一种间充质干细胞的培养基及间充质干细胞的扩增培养方法。
1、间充质干细胞（mscs）是组织工程中一个很有前途的工具，具有自我再生、快速增殖、多能分化等特性，在世界范围内已有超过6000项临床研究(。mscs产生抗炎表型，具有诱导免疫抑制性m2巨噬细胞、耐受性dc、nk-regs和t-regs的产生和扩增，有效缓解有害的免疫反应和持续的炎症。mscs可以来源人体的不同组织，如脂肪组织，脐带或脐带血，骨髓等，其中脐带本来是生物废料，所以获取不存在伦理方面和取材问题。进一步的，间充质干细胞还具有多向分化能力，经特定培养可分化为脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞等，在组织再生和修复中具有应用潜力。但是，mscs在培养过程中，只能维持有限的代数，并且细胞扩增效率严格受培养基的组成影响。因此，提高mscs的扩增效率，在有限的代数里和短时间里获的足够量的mscs细胞，并维持其多能分化干性具有重要意义。
2、xcelligence rtca esight 是一款可以实时监控细胞的成像数据采集和实时测定阻抗的仪器。可获得多种定量参数，即细胞指数倍增时间 (cidt)，最大 ci (cimax) ，生长星空体育 星空体育平台时间 50 (gt50)，其中根据 cidt 大于 50 与否可以判断mscs的分化潜能。
3、本发明的主要目标利用脐带来源的间充质干细胞（uc-mscs），利用在无血清或无动物源的培养基内添加细胞因子，组成mscs培养基，并优化细胞种植密度，更换培养基频率和更换方式等培养方法实现间充质干细胞的有效扩增，同时可以维持细胞的多能分化干性，实现在有限的样本和扩增代数内获得尽量多的具有功能特性的干细胞。
1、本申请为实现间充质干细胞的有效扩增及分化，经过不断探索，提供了一种可实现上述目的的间充质干细胞培养基及具体的扩增培养方法。
2、本申请提供了一种间充质干细胞培养基，其中包括基础培养基和乙硫异烟胺，其还包括血小板第4因子、klotho蛋白及牛磺酸中的一种或两种以上。
3、进一步的，所述的培养基中包括：基础培养基、乙硫异烟胺、血小板第4因子和klotho蛋白。
4、进一步的，所述的培养基中包括：基础培养基、乙硫异烟胺、血小板第4因子、klotho蛋白和牛磺酸。
5、进一步的，所述的培养基中由基础培养基、乙硫异烟胺、血小板第4因子、klotho蛋白和牛磺酸组成。
9、进一步优选的，乙硫异烟胺浓度为80-120µm，更优选为100µm。
10、进一步的，所述培养基中的血小板第4因子浓度为0.1-20µg/ml。
12、进一步的，所述培养基中的klotho蛋白浓度为0.1-20µg/ml。
16、本申请还提供了一种培养间充质干细胞的方法，其包括，使用本申请提供的上述培养基对间充质干细胞进行培养。
17、进一步的，所述方法包括将间充质干细胞以2×103/cm2 – 2×104/ cm2的密度接种于所述培养基内进行培养。
18、进一步的，所述方法包括在培养过程中以间隔1-3天的频率更换培养基，更换方式为全换液或半换液。
19、本申请还提供了所述培养基或所述培养间充质干细胞的方法的用途，所述用途包括促进间充质干细胞增殖扩增、降低间充质干细胞衰老、促进间充质干细胞多功能分化、制备间充质干细胞药物或制剂。
21、进一步的，本申请提供了一种促进间充质干细胞增殖扩增的方法，包括使用本申请所提供的培养基或培养间充质干细胞的方法对间充质干细胞进行培养。
22、进一步的，本申请提供了一种降低间充质干细胞衰老的方法，包括使用本申请所提供的培养基或培养间充质干细胞的方法对间充质干细胞进行培养。
23、进一步的，本申请提供了一种促进间充质干细胞多功能分化的方法，包括使用本申请所提供的培养基或培养间充质干细胞的方法对间充质干细胞进行培养。
24、进一步的，所述多功能分化包括间充质干细胞的成脂分化、成骨分化、成软骨分化等。
25、进一步的，本申请所述间充质干细胞为选自脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、神经、皮肤、羊膜或胎盘中的一种或多种组织的间充质干细胞。
29、本申请主要目的是以无血清或无动物源培养基的基础上添加不同细胞因子构成干细胞培养基，并通过最佳种植细胞密度，培养基更换频率和方式等组合建立干细胞培养方法。通过实时采集细胞指数扩增数据，建立最佳干细胞的培养基组成和有效扩增干细胞的培养方法，并可以直接应用于临床级别的干细胞生产。
1.一种间充质干细胞培养基，其中包括基础培养基和乙硫异烟胺，其还包括血小板第4因子、klotho蛋白及牛磺酸中的一种或两种以上。
2.根据权利要求1所述的培养基，其中包括：基础培养基、乙硫异烟胺、血小板第4因子和klotho蛋白。
3.根据权利要求1所述的培养基，其中包括：基础培养基、乙硫异烟胺、血小板第4因子、klotho蛋白和牛磺酸。
4.根据权利要求1所述的培养基，其由基础培养基、乙硫异烟胺、血小板第4因子、klotho蛋白和牛磺酸组成。
5.根据权利要求1~4任一项所述的培养基，其中，所述基础培养基为无血清培养基或无动物源培养基。
6.根据权利要求5所述的培养基，其中，所述无血清培养基包括胰岛素、转铁蛋白、纤粘连蛋白。
7. 根据权利要求1~4任一项所述的培养基，其中，所述乙硫异烟胺在所述培养基中的浓度为1-200 µm。
8.根据权利要求1~4任一项所述的培养基，其中，所述血小板第4因子在所述培养基中的浓度为0.1-20µg/ml，和/或所述klotho蛋白在所述培养基中的浓度为0.1-20µg/ml，和/或所述牛磺酸在所述培养基中的浓度为1-100mm。
9.一种培养间充质干细胞的方法，其包括，使用权利要求1~8任一项所述的培养基对间充质干细胞进行培养。
10. 根据权利要求9所述的方法，其中，将间充质干细胞以2×103/cm2 – 2×104/ cm2的密度接种于所述培养基内进行培养。
11.根据权利要求9所述的方法，其中，在培养过程中以间隔1-3天的频率更换培养基，更换星空体育 星空体育平台方式为全换液或半换液。
12.权利要求1~8任一项所述的培养基或权利要求9~11任一项所述的方法的用途，其中，所述用途包括促进间充质干细胞增殖扩增、降低间充质干细胞衰老、促进间充质干细胞多功能分化、制备间充质干细胞药物或制剂。
13.根据权利要求1~8任一项所述的培养基或权利要求9~11任一项所述的方法或权利要求12所述的用途，其中，所述间充质干细胞为选自脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、神经、皮肤、羊膜或胎盘中的一种或多种组织的间充质干细胞。
本申请提供了一种促进间充质干细胞增殖扩增的方法及培养基。具体的，所述培养基包括基础培养基和乙硫异烟胺，其还包括血小板第4因子、Klotho蛋白及牛磺酸中的一种或两种以上。以本申请提供的培养基及扩增培养方法可以实现提高扩增效率并维持多能干细胞的培养。
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