qPCR的数据分析根据应用的不同可以分成相对定量和绝对定量两种。例如，处理组细胞与对照组细胞相比，A基因的mRNA改变了多少倍，这就是相对定量；那如果说在一定数目的细胞中，A基因的mRNA有多少个拷贝，这就是我们说的绝对定量。通常在实验室中用的最多的就是相对定量的方法了。
Log（起始浓度）与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线＋En）
•一组标准样本 ——用来生成标准曲线。可以是含有目的基因的质粒、PCR产物、基因组DNA等。
•重复反应孔 –——建议每个样本使用三个或更多重复反应，以确保区分并去除因加样失误导致的误差孔。
首先设计一对引物从基因组DNA上扩增一段含有目的基因的片段，一般来说这个片段最好是比qPCR扩增的目的片段长100bp左右，然后将扩增的片段连接到载体上构建质粒载体，再转到大肠中进行克隆复制，经过质粒的提取及OD值定量或qubit定量（qubit定量从原理上来说要比OD值测定更准确，因此推荐qubit进行质粒浓度测定，推荐使用启衡星qubit试剂盒，性能优越，稳定），我们就可以将质粒梯度稀释得到一组标准品。
1μL双链DNA标准品物质的量（mol）=(稀释倍数×OD数×50×10-9)/（序列长度×649）
1μL双链DNA标准品的数量（copies）=(稀释倍数×OD数×3×1016)/（序列长度×649）
• 一到两个管家基因——用来校对不同样本之间目的基因的实际表达量（对于管家基因的选择我们上上期的内容-实验室设计中已经给大家分享，大家可以翻阅我们前期的内容进行查阅）
• 重复反应孔——建议每个样本使用三个或更多重复反应，以确保区分并去除因加样失误导致的误差孔。
• 实验结果显示——扩增曲线；标准曲线（有些分析方法不需要）；融解曲线（探针法不需要）
通过标准曲线对对照样品、待测样品的目的基因及管家基因进行绝对定量，然后根据计算公式求得相对值即为相对表达量。
标准品：质粒标准品设置5个浓度梯度，分别3个生物学重复；每个样品同样设置3个生物学重复，并设置阴性对照；
结果分析，计算出待测样品1和2与对照组相比目的基因A的表达量是上升了，还是下降了？
从定量结果可以看出，待测样品1和2相对于对照样品在目的基因A的表达量上有所下降。
假定扩增效率为 100 %；假定标准曲线及每次扩增之际间的效率都保持一致；
实验条件优化较为复杂。因此采用此方法进行计算分析，再我们不知道扩增效率的时候，我们得到的结果可能会与实际结果有很大偏差。但是它也可以通过做标准曲线，看扩增效率进行校正，因此在实际操作的时候，推荐大家做一下标准曲线，看实际的扩增效率然后进行结果的校正，确保更准确的结果。
：如果我们知道目的基因和参照基因有相同的扩增效率，但扩增效率不等于2，那么2－△△Ct可以修正为：E－△△Ct，例如扩增效率为1.95，那么计算公式可修正为 1.95－△△Ct
北京启衡星生物科技有限公司是一家立足于生命科学领域，集研发、生产、销售星空体育 星空体育平台于一体的生物技术公司。
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