差。克隆形成率即细胞群被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群（克隆）的百
分数。初代培养细胞多呈二倍体核型；由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大， 是检测药物很好的实验对象。
期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并 能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系（Diploid Cell Line）。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期 冻存。当前世界上常用细胞均在不出十代内冻存。如不冻存，则需反 复传代以维持细胞的适宜密度，以利于生存。但这样就有可能导致细 胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代10～50次左右，细 胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但 贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁 脱落下来，进行传代。采用酶消化法传代
贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后 ，继续生长的空间不足，培养基中的营 养成份也消耗较多，同时代谢废物也有 较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行 传代扩增。
此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退 凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点（多发生在传代
末或衰退期），由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化（Spontaneous Transformation）。转化的标志之一是细胞可能获得永生性（Immortality） 或恶性性（Malignancy）。细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能 力，这样的细胞群体称无限细胞系（Infinite Cell Line），也称连续细胞 系（Continuous Cell Line）。无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或 第三期初阶段。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体（Heteroploid）。细
组织块也可用两只手术刀片将组织块切 碎，这样对细胞损伤较小，但操作时间 长，容易污染。
对某些软组织如肿瘤、胚眙、脑等可将 碎组织块放人注射器玻璃管中挤压分离 。
1、取材分离和组织消化：用生物化学方法将剪碎的组织分 散成细胞团或单细胞。胰蛋白酶，适用于细胞间质较少的 软组织。
胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性性质。细胞永 生性和恶性性非同一性状。
所谓培养瓶培养法，就是将培养对象直接接种于培 养瓶内，再放人培养箱进行培养。
早期的培养瓶是玻璃培养瓶，目前主要用一次 性的塑料培养瓶。与一般瓶子不同，采用的材料都 是星空体育登录入口 星空体育在线官网透明、对生物细胞无毒的材料。采用的玻璃大多 是硼硅酸玻璃。形状主要采用适合细胞贴壁生长和 显微镜观察的扁平形状。
也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周。 此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结
构和功能活动上相似性大。细胞群是异质的（Heterogeneous），也即各细胞的遗传性 状互不相同，细胞相互依存性强。如把这种细胞群稀释分散成单细胞，在软琼脂培 养基中进行培养时，细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）很低，即细胞独立生存性
与此相关的一种方法是盖玻片培养瓶培养，就 是以盖玻片为生长表面，将拟培养的组织、细胞 接种于盖玻片上，然后放进培养瓶中进行培养。 这样具有以下几优点：。
2. 关闭超净工作台内的紫外光灯,点燃酒精 灯(一切操作均需在酒精灯火焰下进行)
原代培养期:从体内取出组织接种培养到第 一次传代培养这个阶段，一般持续1-4周。 这个阶段细胞比较活跃，有细胞分裂，但 不旺盛。
传代期：从原代培养的细胞的一经传代后 便称细胞系。细胞增殖旺盛，当传代10-50 次后，细胞增殖缓慢，以致完全停止。
培养板培养法曾被称为微量培养法，是 现代体外培养技术最为常用的方法之一 。具体做法是将培养细胞接种在培养板 的孔内，然后在C02培养箱内培养。最常 用的培养板有6孔、24孔和96孔培养板， 后者最为常用。一般都是一次性使用。
包括：取材、分散细胞、接种、培养等 ． 在所有操作中，多都要星空体育登录入口 星空体育在线官网注意保持培养物 及生长环境的无菌条件。