作者单位：１广州医学院附属Ｊ“州市・人民医院消化内科。ｒ。州５１０１８０；２ Ｊ“东省人民联院消化内科，广州５１００８０ ‘通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｈ—ｓｈａ＠１６３．ｅｏｍ
力是巨噬细胞的１０～１００倍，它能诱导免疫激活，是 体内惟一能激活初始状态下（幼稚）Ｔ淋巴细胞产生
性…Ｊ。干细胞因子（ｓｃｒ）添加到含ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ４ 的培养液中，可显著增大ＤＣ集落，增加ＤＣ产
培养ＤＣ的关键因素，如何解决这一问题也成为了 该领域研究的热点和难点；③骨髓：骨髓中含有大量 ＣＤ３４＋干细胞，使用合适的细胞因子可诱导出高质 量的ＤＣ。但骨髓不易采集，采集过程容易污染，供 者较痛苦，扩增费用昂贵；④脾脏：从脾脏分离出来 的贴壁单核细胞可以诱导出形态、表型、功能与人外 周血单核细胞培养获得相似的ＤＣ¨１，但由于来源 不方便，实验条件及技术要求高，限制了其应用。
ＧＭ－ＣＳＦ能促进髓系细胞发育，是维持ＤＣ发育 和分化的最根本的细胞因子，主要作用是使造血干 细胞向ＤＣ、单核及巨噬细胞分化，以生成单核细胞 为主，但它只能产生少量的Ｄｃ集落。 ＩＬ４可抑制巨噬细胞、粒细胞增生，从而有利于 干细胞向ＤＣ分化，且能促进ＩＬ．１２分泌，维持ＤＣ
质，对ＤＣ的分化、成熟起到关键的作用。目前使用 成熟的细胞因子主要有：粒细胞巨噬细胞集落刺激
摘要：树突状细胞（ＤＣ）是目前所知的体内功能最强的专职抗原呈递细胞，是机体免疫反应的始动者， 被称为机体防御病原微生物侵袭的重要“哨兵”，在移植排斥、抗肿瘤、抗病毒感染和自身免疫疾病中 发挥着重要作用。获得大量高纯度且表型、功能典型的ＤＣ是上述基础和临床研究的前提。从直接分 离提取到添加细胞因子诱导扩增ＤＣ研究获得很大进展，成为当今免疫学及肿瘤治疗学等相关学科的 研究热点。本文对ＤＣ体外分离、纯化及扩增方法作一简要综述。 关键词：树突状细胞；分离；扩增；细胞培养 中图分类号：Ｑ８１３文献标识码：Ａ文章编号：１００４－２３６９１２００９）１１－０６７９－０４
死因子（ＴＮＦ）－仅、干细胞刺激因子（ＳＣＦ）、细菌脂多 糖（ＬＰＳ）、血小板生成素（ＴＰＯ）等。这些细胞因子 的使用使大量获得ＤＣ用于实验及临床研究成为可
法Ｌｌ引，还是改良Ｔｈｏｍａｓ方法∞Ｊ，均未能解决“直接 法”获得的ＤＣ数量少这一根本问题，因此，该方法 在研究及临床运用中受到极大限制。因而人们将目
为髓系及淋巴系ＤＣ两种。而根据其不同的分化阶 段又可分为ＤＣ前体细胞、未成熟ＤＣ、成熟ＤＣ。在 不同的分化阶段，ＤＣ的功能截然不同，未成熟ＤＣ
功能相似。该法大大缩短了ＤＣ诱导的时间，也减 少了体外培养污染的概率；④钙离子载体（Ｃａｌｃｉｕｍ星空体育网站 星空体育首页 Ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ，ＣＩ）诱导法：星空体育网站 星空体育首页最近几年，钙离子制剂吸引了
人们研究的兴趣，它能刺激ＤＣ成熟。Ｌｉｕ等【１刘发 现，适量的ｃＩ不仅可以诱导外周血单核细胞和造血 干细胞向ＤＣ的转化，而且可以加速此诱导过程，经 处理２０～４０ ｈ后即可获得活化ＤＣ的许多典型特 征，能显著上调共刺激分子如ＣＤ８６、ＣＤ８０（尤其是
ｆｅｅｔｉｏｎｓ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｓ ｋｎｏｗｎ ＶＯ．Ｈｏｗ
ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｏｗｅｒｆｕｌ ａｎｄ ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ ａｎｔｉｇｅｎ－ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｉｎ ｖｉ—
分化阶段而变化。目前国内外比较公认鉴定ＤＣ主 要采用ＣＤＩａ和ＣＤ８３分子。ＣＤｌａ是鉴定人外周血 与骨髓中ＤＣ的最好标记，因此多采用ＣＤｌａ阳性细 胞数的多少来反映ＤＣ的数量；ＣＤ８３分子是ＤＣ的 成熟标记，源自文库ＤＣ培养早期不表达ＣＤ８３分子，当成
熟时才表达ＣＤ８３分子，目前研究中也主要用ＣＤ８３ 分子的表达量来比较不同来源或不同细胞因子、不
前体细胞进行培养扩增。磁珠分离法能弥补ＤＣ前 体细胞纯度低这一缺陷，但价格比较昂贵。 细胞因子诱导、扩增ＤＣ：自Ｃａｕｘ在１９９２年提
上调ＣＤ８６），ＤＣ的成熟表面标志分子ＣＤ８３也显著 增多。吴军等旧Ｊ研究表明由ｃＩ诱导ＰＢＭＣ向Ｄｃ 分化的信号，与组合细胞因子不同，不需通过受体／
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００８０，Ｃｈｉｎａ；
‘Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｈ－ｓｈａ＠１６３．ｅｏｍ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ
干细胞，形态特别，表面具有典型的树突状突起，在 体内分布广泛，但数量甚微，仅占外周单个核细胞
ｓｅｐａｒａｔｅ，ｐｕｒｉｆｙ ａｎｄ ａｍｐｌｉｆｙ ＤＣ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ；Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｃｅｌｌ
ｐｕｒｉｆｙ ＤＣ ｗｉｔｈ ｈｉ。ｇｈ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｙｐｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｉｓ ｔｈｅ ｐｒｅｍｉｓｅ ｏｆ ｂａｓｉｃ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｄｅ
ｓｅａｒｃｈ．Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｉｓ｛，ｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ＤＣ ｈａｖｅ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｂｏｕｔ ｈｏｗ
加工处理抗原的能力提高，免疫共刺激分子上调，并 可促进ＩＬ－８、’矾Ｆ—ａ、ＩＬ一１２、ＴＮＦ一１等细胞因子的产 生０１０］。ＰＧＥ２可促进ＤＣ分泌ＩＬ－１０，抑制ＤＣ分泌 ＩＬ一１２、表达ＭＨＣ一１Ｉ和呈递抗原，在ＤＣ成熟早期如 果没有ＰＧＥ２的诱导，成熟ＤＣ（ｍＤＣ）将不具有趋化
小板残留必然导致ＰＢＭＣ贴壁能力下降，最终影响 ＤＣ的产量；②运用ＨＥＳ（羟乙基淀粉）离心沉淀法
少开放性操作的次数，降低实验污染的概率，适合大 量血液的分离。ＨＥＳ离心法同样适用于骨髓、脐血 单个核细胞的分离¨８ｌ；③磁珠分离法：该方法主要 解决的问题是提高ＤＣ的纯度，运用磁悬珠先分离 出高纯度的ＤＣ前体细胞，再运用细胞因子对ＤＣ
能多低下，不能在体内产生有效的抗肿瘤免疫反 应【５１，因此需要体外扩增足量的功能良好的Ｄｃ以 帮助机体完成抗肿瘤作用，ＤＣ疫苗应运而生。 ２．１前体来源
目前认为，ＤＣ可由人ＣＤ３４＋干细胞和ＣＤｌ４＋ 单核细胞产生。ＣＤ３４＋干细胞存在于人骨髓、脐血 和成年人的外周血中，ＣＤｌ４＋单核细胞主要存在于 人外周血中。不同来源的ＤＣ前体细胞在体外培养 和诱导成为成熟的ＤＣ有不同的优缺点：①外周血： 外周血由于其采集方法简单易行，且较骨髓而言不 易污染，因而易于被接受、推广。但外周血中含有较 多的粒细胞、红细胞和血小板，这三者都是影响外周 血ＤＣ培养生成的主要不利因素；②脐带血：脐带血 较易获得，价格低廉，而且脐带血含有丰富的细胞因 子，组织相容性好。文献报道从脐带血中可以培育 扩增出大量成熟的ＤＣ∽Ｊ，但从脐带血中纯化出
素。Ｃｈｅｎ等旧ｊ的研究发现，加入ＴＮＦ一仪的ＤＣ表面 ＣＤ８３、ＣＤ８０和ＣＤ８６的表达较未加入者明显增强， 从培养液中去除ＴＮＦ—ａ
率¨２｜。钙离子制剂及其他简单化合物如ＮｉＣｌ：、 ＭｎＣｌ２、ＳｎＣｌ２等可以刺激人ＰＢＭＣ来源的ＤＣ表面 标志物表达增加，使ＤＣ抗原提呈能力和对Ｔ细胞
的刺激功能都增强１１３。１４ Ｊ。卡介苗（ＢＣＧ）可促进 ＤＣ的表型成熟，增强混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）的
能力。但ＢＣＧ．ＤＣ不同于典型的成熟ＤＣ，它分泌高 水平ＩＬ．１０，并且诱导调节性Ｔ细胞产生，这种特性
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
０【、ＩＬ—１１３、ＩＬ－６及ＰＧＥ２共同培养２４ ｈ可诱导出 ＦａｓｔＤＣ，ＦａｓｔＤＣ与传统方法培养出来的ＤＣ形态及
的开放性操作容易造成实验污染，且ＰＢＭＣ回收率 和血小板的清除率易受操作经验的影响，过多的血
细胞，用合适的细胞因子组合诱导出成熟的ＤＣ。 ＤＣ前体细胞的获取方法有：①用Ｆｉｃｏｌｌ／
ＰＢＭＣ，再利用单核细胞贴壁生长的特性，去除非贴 壁细胞，获得的贴壁细胞即为单核细胞。这一方法 已被研究及临床广泛运用，但只适合于少量血液的
混合淋巴细胞反应（刺激指数增加８倍）。 其他的细胞因子包括ＣＤ４０配体（ＣＩＭ０
激分子（Ｃｏ．ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ）＇ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ），其相应受体 ＣＤ４０分子持续表达于ＤＣ表面。ＣＤ４０Ｌ在ＤＣ的
ＣＤｌ４、ＣＤ８３、ＣＤ５４、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤｌｌｃ、ＭＨＣ ＩＩ、 ＨＬＡ—ＤＲ、ＩＬ一１