（11）再培养48~72小时。此时10ml培养液病毒量约为3×1010~3×1011。若需要，进行MOI星空体育网站 星空体育首页测定以估计病毒滴度。
注：此时如果病毒量已足够，则可立即进入病毒滴定步骤。600×g离心5分钟收集细胞，弃上清，加入1/10原始体积的溶液重悬细胞。-20℃/37℃冻融3次，台式离心机上以最大速率沉淀细胞碎片，收集上清，进行病毒滴定。
（2）取0.5ul首次扩增的病毒保存液，加入DMEM5%至1ml，混匀，这样稀释应得到的MOI值约为5。
（3）移去培养液，小心加入病毒混合液，切勿破坏细胞单层，十字形慢慢晃动3次，37℃CO2孵箱中培养90分钟。
（16）再培养48-72小时，此时约有3×1011~3×1012个病毒。若需要，进行MOI测定估计病毒滴度。
如果要收集病毒颗粒，先收星空体育网站 星空体育首页集被感染细胞，然后重悬在5ml DMEM5%中。-20℃/37℃冻融3次，离心沉淀细胞碎片。此时5ml DMEM5%中3×1011~3×1012个病毒颗粒，浓度为6×1010~6×1011vp/ml。然后滴定病毒储存液，或者用标准的氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。
（5）再培养72小时，这时在10ml溶液中大约有5×109~5×1010个病毒颗粒，进行MOI测定以估计病毒颗粒。
注：如果此时得到的病毒量已足够，可立即进行病毒滴度测定。收集细胞，600×g离心5分钟沉淀细胞，去上清后加入最小体积（一般为原始体积的1/10即1ml）病毒保存溶液重悬细胞。-20℃/37℃冻融3次，台式离心机上以最大速率离心去除细胞碎片，收集上清，然后进行病毒滴定。
（7）转入15ml无菌离心管中，台式离心机上以最大速率离心10分钟，收集上清冻存于-20℃或-80℃。
（9）将3ml细胞裂解液上清加入12ml DMEM5%中，混匀。移去细胞培养液，每瓶小心加入5ml混合液，十字形慢慢晃动混匀3次，37℃CO2孵箱中培养90分钟。此时MOI值约为25。
（12）移入50ml离心管中，台式离心机上最大速率离心10分钟，取出上清保存。
（14）将45ml细胞裂解液上清加入105ml DMEM5%混匀，从培养瓶中移去培养液，加入5ml混合液感染细胞，十字形缓慢晃动3次混匀，37℃培养90分钟。此时MOI值约为25。