M TT 比色法测定细胞生长曲线郝新保张利朝殷缨韩秀珍陶秦渝郝晓柯张盈华(第四军医大学唐都医院中心实验室西安 710038)关键词细胞生长曲线 M TT 比色法中图号Q 28在有关肿瘤细胞生物学的研究中, 我们常常要测定细胞的生长状态, 制作细胞生长曲线, 以往的方法是取少量细胞在镜下或计数仪中计数, 然后标注在坐标纸上, 制作出细胞生长曲线. 这种方法对同一样品要求计数几次取平均值, 不但操作繁琐、 费时, 更主要的是误差较大, 可达到20%～ 30%[1 ], 包括取样误差、 计数误差等. 为了 能简便、准确地测定细胞数, 我们建立了 基于...
M TT 比色法测定细胞生长曲线郝新保张利朝殷缨韩秀珍陶秦渝郝晓柯张盈华(第四军医大学唐都医院中心实验室西安 710038)关键词细胞生长曲线 M TT 比色法中图号Q 28在有关肿瘤细胞生物学的研究中, 我们常常要测定细胞的生长状态, 制作细胞生长曲线, 以往的方法是取少量细胞在镜下或计数仪中计数, 然后标注在坐标纸上, 制作出细胞生长曲线. 这种方法对同一样品要求计数几次取平均值, 不但操作繁琐、 费时, 更主要的是误差较大, 可达到星空体育登录入口 星空体育在线官网20%～ 30%[1 ], 包括取样误差、 计数误差等. 为了 能简便、准确地测定细胞数, 我们建立了 基于M TT 比色法的细胞生长曲线培养基为 GI BCO 公司产品, 小牛血清为杭州四季青产品, M TT 为 SERV E 产品, 其它试剂均为国产.1. 2仪器HL 22029P 型酶标自动分析仪为国营二六二厂产品, Profile , Elite 型流式细胞仪为美国 COUL TER公司产品.1. 3细胞培养选用人乳腺癌细胞系 SK2BR23. 细胞培养在含10% 小牛血清的 RPM I 1640培养基中, 37℃, 5%CO 2.1. 4镜下计数测定细胞数细胞消化后悬浮在一定量的培养基中, 用计数板按常规方法在倒置显微镜下计数, 每个样品测三次, 取平均值.1. 5流式细胞仪计数细胞消化后悬浮在一定量的培养基中, 取0. 2 m l 细胞过滤后用流式细胞仪自动计数.1. 6M TT 比色法计数M TT 比色法计数为间接计数,先要做出细胞的标准曲线, 然后根据欲测样品的 A 值计算出相应的细胞数.1. 6. 1制作标准曲线l孔开始在96孔板中倍比稀释至1× 102细胞孔, 每个稀释度三孔细胞, 培养板置37℃培养4 h 后细胞贴壁, 每孔中加入20 gM TT 继续培养4 h, 然后吸出150 l 培养液, 加入等量DM SO , 37℃ 20 m in, 570 nm 处测定吸光度[2], 用二六二厂酶标自动分析仪程序绘出细胞标准浓度曲线℃培养, 每天用M TT 比色法测定3孔细胞的 A 值, 在标准曲线上计算出相应的细胞数, 即可绘出细胞的生长曲线岁, 讲师, 主治医师2结果2. 1细胞数与 A 值的标准曲线根据各稀释度的 A 值制作细胞浓度的标准曲线细胞浓度的标准曲线肿瘤细胞的M TT 比色法生长曲线根据每天测定的三孔细胞的 A 值在标准曲线上求得其对应的细胞数, 7～ 10 d 后即可绘制细胞生长曲线细胞的生长曲线×; 20×.2. 3细胞接种密度对生长曲线的影响当细胞接种密度较低 (2× 102孔) 和较高 (2× 104孔) 时, 对细胞生长曲线的形状有一定的影响, 如图2.2. 4 M TT 比色法与镜下计数法及流式细胞仪计数法的比较为了 比较M TT 比色法和镜下计数法制作的细胞生长曲线, 用流式细胞仪的计数结果作为参照, 结果表明 M TT比色法与流式细胞仪计数结果更接近, 明显优于镜下计数法的结果.3讨论从结果可以看出, 用M TT 比色法制作细胞生长093第四军医大学学报(J Fourth M ilitM ed U niv) 1997; 18(4)