MTT比色法测定细胞生长曲线、细胞生长曲线拟合、细胞群体倍增时间的简化计算.ppt
细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。
一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮然后贴壁,随后度过长短不同的迟缓期(潜伏期),即进入大量分裂的对数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入稳定期,然后退化衰亡。
(2)24 h后开始进行细胞计数,以后每隔星空体育登录入口 星空体育在线官网24 h计数一次,每次取4孔细胞,分别进行计数,计数结果取4孔的平均值。连续计数6天。
(3)根据细胞计数结果,以单位细胞数(细胞数/mL)为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线孔板细胞计数板
MTT:全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide
汉语化学名: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐
活细胞的线粒体中琥珀酸脱氢酶能够使外源性的MTT还原,同时在细胞色素C 的作用下,生成不溶于水的蓝色(或蓝紫色)络合物甲臜。
按照时间间隔,通过酶联免疫检测仪在490nm(或570nm)波长处测定甲臜的光吸收值(A值)。
在通常情况下,甲臜生成量与活细胞数成正比,因此可根据光吸收值推算出活细胞的数目。
例如:用培养液将待检细胞重悬,得到细胞悬液,按照4x10^4/ml细胞密度梯度,分别接种于 96孔板,每孔 100μl,重复 3孔;采用 MTT法测量吸光值A值,同一浓度下测得的A值为该浓度下3孔的平均值。
例如:用培养液将待检细胞制成 110^4/ml的细胞悬液;分别接种于多块96孔板,每孔 100μl ;在 24、 48、 72、 96及 120 h时间点取一块 96孔板,采用 MTT法测量吸光值A值得到吸光值A值与时间的关系。
曲线拟合(curve fitting)是指选择适当的曲线类型来拟合观测数据,并用拟合的曲线方程分析两变量间的关系。
SPSS是世界上最早的统计分析软件,由美国斯坦福大学的三位研究生Norman H. Nie、C. Hadlai (Tex) Hull 和 Dale H. Bent于1968年研开发成功,同时成立了SPSS公司,并于1975年成立法人组织、在芝加哥组建了SPSS总部。
1984年SPSS总部首先推出了世界上第一个统计分析软件微机版本SPSS/PC+,开创了SPSS微机系列产品的开发方向,极大地扩充了它的应用范围,并使其能很快地应用于自然科学、技术科学、社会科学的各个领域。
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