外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡（30～150 nm），它可将源自亲代细胞的特定物质递送至疾病发展相关的受体细胞，因此一直被认为可作为疾病进展的
CircLPAR1 是外泌体中的环状 RNA 分子，在结直肠癌（CRC）患者血浆外泌体中会发生显著变化。南京医科大学团队在 Molecular cancer 发文[1]，通过对 CRC 特异性的外泌体 circRNA 进行鉴定和富集，最后使用 qPCR 检测后进行功能评估。本研究对血浆外泌体 circLPAR1 可作为 CRC 高灵敏早期诊断标志物提供了新的证据。
我们也许会有疑问：外泌体本来就少，提取的 RNA 就更少，后续做 qPCR 检测岂不是难上加难？想知道 qPCR 检测外泌体是否具有合理性，我们需要先了解如何进行这项实验。
包括 Umibio 在内的很多公司都有针对各种不同样本的外泌体提取试剂盒。样本预处理阶段很重要，甚至决定了后续提取外泌体的纯度和量。详细操作注意可以点击上期文章链接了解：
外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。
采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒：适用于长片段 RNA（如 mRNA、LncRNA 等）、miRNA 加尾法逆转录试剂盒做反转录：适用于短片段 RNA（主要为 miRNA）的加尾法。
可以看到 qPCR 检测外泌体可行且可靠，但实验过程并不简单，因此我们对经常会遇到的问题及解答也进行了整理，帮助大家更好的完成实验。
外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。
外泌体 RNA 含量很低，不建议使用微量紫外分光光度计定量，可以使用 Agilent 2100 生物分析仪等定量，也可以直接按最大体积进行逆转录实验。
外泌体没有通用的内参选择，可以使用外参（c星空体育 星空体育平台el-miR-39）作为参照。
4. 外泌体多样本进行 qPCR 检测时，扩增曲线和溶解曲线有差异，是否正常？
一般来说属于正常现象，由于外泌体不像细胞或者组织来源稳定，不同外泌体样本及处理的差异，可能导致外泌体里核酸含量及片段大小不同，会产生扩增曲线或溶解曲线. 外泌体 qPCR 检测 CT 值较大是否正常？
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宇玫博生物服务优势：15 年 qPCR 检测经验，5 年外泌体 qPCR 检测经验。设备为 ABI 仪器，检测稳定；专注于外泌体研究，有丰富的经验。团队技术支持有深度，能够实现以上实验全流程的技术支持。
新型 M-MLV 突变体逆转录酶具有很强的抗干扰能力及扩增能力，15 分钟得到的扩增产物量可以达到 AMV 逆转录酶大约 1 小时的产物量（Ct 值相同）。后续逆转录产物建议用于 PCR、qPCR，不建议用于基因克隆。
本试剂盒采用具有超强扩增能力和抗干扰能力的热启动 DNA 聚合酶，结合其高度优化的缓冲液体系和染料系统，使之星空体育 星空体育平台具备更强的扩增效率、抗干扰能力，更高的灵敏度和特异性。在相同的情况下具有起峰更早、得到的荧光信号更强、Ct 值更小及熔解曲线特异性更高等特点。此外，为了进一步简化操作，本试剂盒的 2×SYBR Green qPCR Master Mix 预混了 ROX1 染料（highROX）或预混了 ROX2 染料（low ROX），从而只需要将模板 cDNA、引物以及 ddH2O 添加进去，即可进行 qPCR 反应。
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