由普拉特泽生物细胞实验平台为大家总结分享,文末附上细胞增殖检测的理论与实操视频教程供大家学习。上两篇咱们简单学习了一下细胞增殖的介绍与检测细胞增殖的七种方法,一直在普及细胞增殖检测的理论知识,今天终于开始学习细胞增殖检测的实操步骤啦。上两篇理论链接奉上:

今天,普拉特泽给大家分享的是细胞增殖检测种最常用的星空体育网站 星空体育首页检测方法,cck8法检测细胞增殖。Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。话不多说来上干货吧:
实验试剂与耗材:DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰酶、6cm细胞培养皿、抗生素、96孔细胞培养板、CCK-8
(2)戴上手套和口罩帽子,从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管,立即投入37℃ ddH2O中,轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。
(4)在超净台中,在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基,打开冻存管,将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中,常温1000 rpm离心3分钟,吸除上层的培养液。
(5)1mL培养基重悬细胞沉淀,轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中,补足培养基至5 mL,置于37℃、5% CO2培养箱培养。

(3)各组细胞在检测时间点时,每孔加1/10体积CCK-8,在37℃、5%CO2培养箱中培养2小时。
(4)选择450 nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制细胞生长曲线)通过

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