细胞 增殖- 毒性 试验 步骤 1 、 细胞 传代 、 细胞计数 、 细胞增殖- 毒性 试验 步骤： 试验预备：用 75%酒精擦生物平安柜台面 2 遍，紫外线ml 离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培育瓶），复温试验所需试剂[细胞培育液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胰酶（0.25% Trypsin-EDTA）、胎牛血清（FBS）、双抗]，全部的试剂、仪器放入生物平安柜前要用酒精喷洒消毒。显微镜下看细胞生长状态，有无污染。 1）倒去培育瓶内的培育液； 2）加入 PBS 2ml 洗涤培育瓶内细胞 2 次； 3）加入胰酶 500ul/0.5ml 2～10min（具体时间因细胞而异，可在显微镜...
细胞 增殖- 毒性 试验 步骤 1 、 细胞 传代 、 细胞计数 、 细胞增殖- 毒性 试验 步骤： 试验预备：用 75%酒精擦生物平安柜台面 2 遍，紫外线ml 离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培育瓶星空体育 星空体育平台），复温试验所需试剂[细胞培育液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胰酶（0.25% Trypsin-EDTA）、胎牛血清（FBS）、双抗]，全部的试剂、仪器放入生物平安柜前要用酒精喷洒消毒。显微镜下看细胞生长状态，有无污染。 1）倒去培育瓶内的培育液； 2）加入 PBS 2ml 洗涤培育瓶内细胞 2 次； 3）加入胰酶 500ul/0.5ml 2～10min（具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培育瓶促使细胞脱落）； 4）加入含 10%FBS 的培育液 1～1.5ml[培育液：胰酶=（2～3）:1]中和胰酶； 5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度星空体育 星空体育平台以不起气泡为宜； 6）将单细胞悬液吸入 10～15ml 离心管中，低速离心 800rpm 3 分钟，倒去上清液； 7）加入含 10%FBS 细胞培育液 1 ～l 2ml 吹打悬浮细胞至单细胞悬液； 8）吸取 20ul 细胞悬液（10ul 细胞悬液+10ul 台盼兰液：给坏死细胞染色，推断细胞活力）至细胞计数板，进行 细胞计数； CCK-8 试验： 9） 在 96孔板中，给每孔加 100L（约 约 7 70 00 00 个）的细胞悬液，将培育板放在培育箱预培育24- -2 72 小时（37℃，5%CO2），使细胞贴壁； 10） 向培育板中加入 10L 不同浓度 （5 5 、 10 、 20 、 40 、 80 、 160ug/ml ） 的待测药物； 11） 将培育板在培育箱孵育 一段适当的时间 4 24 小时（例如：6、12、24或 48小时）（药物起作用）； ： 留意：假如待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK 之前更换新颖培育基（除去培育基，并用培育基洗涤细胞两次，然后加入新的培育基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的状况下，可以不更换培育基，直接扣除培育基中加入药物后的空白吸取即可。 12）向每孔加入 10L （约 10% ） CCK-8 溶液（留意不要再孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）； 13）将培育板在培育箱内孵育 1 ～4 小时（半小时测一次 OD 值）； 14）用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。