培养对象: MMSC 细胞规模: 1000L 细胞大规模培养技术复苏 ,立即投入 37 ℃水浴锅中, 轻微摇动。液体融化 1分钟,拿出来喷点酒精放到超净工作台里。 10ml 培养基的 15ml 的离心管中, 1000 转离心 6分钟。 ,加 1 ml 新鲜培养液把细胞悬浮起来。转移到培养瓶中,加新鲜培养液混匀,静置 3分钟,镜检。 、培养人名字,放到 CO2 培养箱中培养。种子细胞扩大培养过程 1. 25cm 星空体育 星空体育平台2方瓶 2. 75cm 2方瓶 3. 细胞罐 4. 40l 细胞罐 5. 120l 细胞罐 6. 500l 细胞罐 l细胞罐?接种密度 5万~ 50 万/ml 之间?全程严格无菌操作, 培养物无微生物污染和其他细胞污染培养设备与培养形式?贴壁培养设备:搅拌反应器、中空纤维反应器、玻璃珠床反应器等。?培养形式: 分批式培养,流加式培养,半连续式培养,连续式培养。老师操作步骤老师操作的步骤:从二氧化碳培养箱中取 25 立方厘米的培瓶,镜检,细胞生长良好,在超净工作台用酒精棉球擦拭瓶口,倒出培养液, 洗2次,倒入胰蛋白酶,放入培养箱中 1分钟,在倒入新配置的培养液,分装在 4个离心管中。在另外 4个管中各倒入新配置的培养液 10 毫升。注意事项(1) 超净工作台的准备:实验所需器材与无菌器皿放置, 开紫外,通风。(2) 镜检:观察细胞的生长密度,有无染菌。(3)手消毒,培养瓶口用酒精擦拭,用洗时,吹打。(4)胰蛋白酶的作用:使动物细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解,从而使粘连的细胞脱壁悬浮。胰蛋白酶处理时间过长对细胞有毒性作用, 最适温度 37 摄氏度。(5)培养液用前摇匀。 组的操作步骤 A细胞计数,结果为 8万每毫升。 B把 10 毫升的培养液平均放入 6孔,把3毫升细胞液平均放入 6孔,再混匀。镜检,标记,放入培养箱培养。(星期一下午 3点) C星期二,三镜检观察,细胞不断生长,星期四发现细胞染菌。
