1.细胞冻存液提前配置：冻存液配置比例根据实验习惯即可，若细胞不多或使用人数较少，建议一次少量配置，配置完成后，由于DMSO的存在，因此需要严格避光保存。
2.需要冻存的细胞密度要求≥90%，镜下观察细胞，当细胞密度满足要求后，弃掉原有培养基，沿培养皿边缘加入1ml温浴的PBS缓冲液清洗。
4.消化到时间后，加入二倍胰酶体积的培养基终止消化，用移液器将细胞全部吹下，转移至离心管内。
6.弃上清，加入1ml配置好的冻存液，用移液器轻轻吹打10-15次混匀。
7.冻存管标记好相应信息，包括细胞名称、代数、冻存时间、操作者姓名等，将上述混悬液全部转移至冻存管内，拧紧冻存管管口，放入程序降温盒内。
8.将程序降温盒放入-80℃冰箱内，36h后可从程序降温盒内拿出细胞放在细胞冻存架上保存。
1.细胞冻存管具体存放方式、温度、时间等星空体育登录入口 星空体育在线官网由实验室条件决定，我所述只是我实验过程中冻存细胞的保存星空体育登录入口 星空体育在线官网方法。
2.关于冻存液的配置，我实验所用配方为培养基：血清：DMSO =7：2：1，整个实验过程中冻存的细胞复苏状态良好。
1.在冻存管上标记信息时使用一支质量较好的马克笔，保证在后期进行细胞复苏时信息不会被水或酒精洗掉。
3.细胞冻存原则为“慢冻”，因此，细胞加入冻存管后如何保存应严格遵守冻存流程，避免冻存太快，产生结晶。
4.二甲基亚砜（DMSO）是一种细胞保护剂，在深低温情况下可防止细胞内形成冰晶，减少细胞损伤，因此冻存液配置中DMSO必不可少，但可以改变血清的比例，对于一些原代细胞或较为重要的细胞，可将血清比例提高至50%-90%，保证其有较高的存活率。
5.细胞冻存后再进行复苏时，细胞数量不可避免会减少，因此，在冻存前，细胞量要足够多，密度≥90%。
6.细胞混悬液加入冻存管后，不宜在常温放置过久，因此应先将细胞冻存盒放入冰箱，再进行后续相关实验。