1.MTT比色法测定细胞生长曲线.细胞生长曲线拟合及细胞群体倍增时间的简化计算
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细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。
一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮然后贴壁,随后度过长短不同的迟缓期(潜伏期星空体育登录入口 星空体育在线官网),即进入大量分裂的对数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入稳定期,然后退化衰亡。
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(2)24h后开始进行细胞计数,以后每隔24h计数一次,每次取4孔细胞,分别进行计数,计数结果取4孔的平均值。连续计数6天。
(3)根据细胞计数结果,以单位细胞数(细胞数/mL)为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线孔板细胞计数板
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活细胞的线粒体中琥珀酸脱氢酶能够使外源性的MTT还原,同时在细胞色素C的作用下,生成不溶于水的蓝色(或蓝紫色)络合物甲臜。
按照时间间隔,通过酶联免疫检测仪在490nm(或570nm)波长处测定甲臜的光吸收值(A值)。
在通常情况下,甲臜生成量与活细胞数成正比,因此可根据光吸收值推算出活细胞的数目。
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例如:用培养液将待检细胞重悬,得到细胞悬液,按照4x10^4/ml细胞密度梯度,分别接种于96孔板,每孔100μl,重复3孔;采用MTT法测量吸光值A值,同一浓度下测得的A值为该浓度下3孔的平均值。
依检测结果,得到吸光值A值与细胞浓度的对应关系,绘出标准曲线.细胞生长曲线的测定:
例如:用培养液将待检细胞制成1×10^4/ml的细胞悬液;分别接种于多块96孔板,每孔100μl;在24、48、72、96及120h时间点取一块96孔板,采用MTT法测量吸光值A值得到吸光值A值与时间的关系。
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曲线拟合(curvefitting)是指选择适当的曲线类型来拟合观测数据,并用拟合的曲线方程分析两变量间的关系。
SPSS是世界上最早的统计分析软件,由美国斯坦福大学的三位研究生NormanH.Nie、C.Hadlai(Tex)Hull和DaleH.Bent于1968年研开发成功,同时成立了SPSS公司,并于1975年成立法人组织、在芝加哥组建了SPSS总部。
1984年SPSS总部首先推出了世界上第一个统计分析软件微机版本SPSS/PC+,开创了SPSS微机系列产品的开发方向,极大地扩充了它的应用范围,并使其能很快地应用于自然科学、技术科学、社会科学的各个领域。
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1.做图法:在细胞生长曲线的对数生长期找出细胞增加一倍所需的时间,即倍增时间,
计算比较复杂,而我们基于以往曲线进行理论推导而行的理论倍增时间,计算相对简单。
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