传统CAR-T的“个性化定制”模式存在制备周期长、成本高、个体差异大等问题，限制了其临床普及。体内CAR-T技术有望推动细胞治疗向 “即用型”（off-the-shelf） 模式转变，为实现标准化、规模化生产奠定了基础。更重要的是，该模式可提升CAR-T在急性疾病、实体肿瘤以及自身免疫疾病等更广泛适应症中的应用潜力。
如何让基因递送系统只进入T细胞，而不感染其他细胞，而且是静息状态下的T细胞。
1)病毒载体（AAV、LV）：可能被宿主免疫系统快速清除或诱发抗体应答；
2)LNP/mRNA系统：可能激活先天免疫反应（如TLR通路），导致炎症反应；
1)体内剂量分布不均：部分患者T细胞可能未充分转导，可能仅有极少细胞表达CAR结构。
可诱导表达系统（如药物调控型CAR表达开关），增加载体靶向性，或者采取局部注射的方式（淋巴结）。
1)与传统体外扩增的CAR-T不同，in vivo CAR-T 依赖患者自身免疫状态；
2)若患者免疫抑制、成功转染D的T细胞数量不足，则体内扩增效率低、治疗效果差
2)in vivo CAR-T为“体内生成”，无法在回输前质控细胞产品；
当前体内CAR-T主要在血液瘤中探索（如CD19、CD20），因为靶点明确、易监测；
已经上市的自体CAR-T产品，通过体外转导成功后再进行扩增使用病毒量很小，但是体内回输病毒载体，回输病毒量完全不是一个级别（病毒滴度相同情况下），是否真的可以降低成本。
虽然目前使用LNP载体的企业再临床上取得先机，并在临床展现了一定的疗效。取决于LNP载体的先天优势，免疫原性低和更易进入静息状态下的T细胞并完成CAR结构的表达。但是更相信慢病毒载体可以取得In-vivoCAR-T的最后胜利，原因如下：
2)细胞药物可以在血液肿瘤中发挥较大的作用，主要在于其持续性（扩增能力和细胞耗竭较慢），LNP载体转导的CAR-T持续性较差。
3)LNP载体转染T细胞表达十分不均一，很多T细胞膜表面的CAR结构密度差异很大，造成转染阳性率很高的假象。
4)尽管慢病毒载体需要克服很多障碍，但是只有具有持续性特点的CAR-T细胞才能真正区别去其他药物，不断的在体内对表达特异性靶点细胞产生杀伤作用，直至该细胞完全消失。
脂质纳米颗粒（LNP）是一种会被细胞内吞的物质。用LNP包埋mRNA后，细胞内吞LNP时，mRNA会逃逸进入细胞质，翻译后降解。在LNP表面偶联一些T细胞表面的特异性配体，可以促进T细胞对LNP的摄取。
②趋化因子配体：CCL21，可结合T表面CCR7受体，靶向淋巴结归巢T细胞；
③Aptamer：针对CD28的Aptamer不仅能够靶向T细胞，还能够提供共刺激信号从而激活T细胞
LV是由HIV病毒改造而成的工程化病毒，慢病毒通过VSV-G与低密度脂蛋白受体LDL-R结合，实现基因的转染。而LDL-R并不只在T细胞表面表达，而是广泛表达在许多细胞中。因此，也需要设计靶向T细胞的一些特异性配体。有人选用CD3 scFv靶向所有T，有人选用CD8 scFv靶向细胞毒性T，也有人选用CD7 scFv靶向非激活状态的T。与上面类似，这种方法也可以加入趋化因子配体和共刺激配体。
当前，In vivo CAR-T的核心在于如何高效、安全地将CAR基因递送至体内的T细胞。主流策略主要分为两大阵营：以脂质纳米颗粒（LNP）为载体的非病毒路径和以慢病毒（Lentivirus）为代表的病毒载体路径。
优势：生产相对快速、非病毒整合（理论上无插入突变风险）、免疫原性可能较低。
劣势：表达瞬时，可能需要重复给药；转导效率相对较低且转导不均一。在体内环境中特异性靶向T细胞以及转导效率都是非常大的挑战。
优势：直接整合基因组中，实现CAR的持久表达，膜表面表达CAR结构密度相对均一。
劣势：存在潜在的插入突变风险（尽管在体外自体CAR-T疗法中已通过基因检测手段规避风险）；生产工艺相对复杂；体内直接回输慢病毒易产生免疫反应。
可以说， LNP-mRNA快速转染并表达发挥作用的闪电战，那么慢病毒载体则是一场着眼于长久持续性的持久战。
LNP 的制备需精确控制脂质自组装过程。实验室采用的主流方法是微流控法。实验室级微流控芯片能精准控制LNP与 mRNA 混合，实现 90% 以上的包封率。
慢病毒载体（LVV）的规模化生产质量，其目前面临纯度、一致性与规模三大核心瓶颈。
由于LV需直接注射进入人体循环系统，其纯度必须达到“体内安全级”。生产中残留的杂质（如未消化质粒、宿主细胞蛋白、细胞碎片以及缺陷病毒颗粒），目前采用过滤和离心方式难以完全去除杂质。这些杂质不仅可能引起非特异性免疫反应，还可能导致脱靶效应或载体功能异常，严重威胁治疗安全性。
In vivo给药要求LV在不同批次间具备高度一致的病毒滴度、转导效率和靶向能力。传统瞬转工艺由于质粒转染效率的随机性和表达时间的不稳定性，导致关键质量属性（CQAs）波动显著，直接影响疗效的可预测性与监管合规性。
In vivo-CAR-T面向更广泛的患者群体，要求LVV生产实现工业级放大。然而，瞬转工艺在规模放大过程中常面临病毒功能性滴度下降、生产成本急剧上升等问题。例如，从10L反应器放大至100L星空体育 星空体育平台时，有效滴度下降可达45%以上，难以稳定供应临床及商业化需求。
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