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单细胞基因组扩增技术大全
发布:2024-05-13 17:48:08 浏览:

  单细胞基因组扩增技术的理想就是将一个细胞中的DNA完整、准确的扩增n倍(许多一般在百万级别)。这个梦想一直以来就很有挑战,近年来也有各种技术不断问世,咱之前也星空体育网站 星空体育首页多次介绍过不同的方法,今天就一并总结一下,以便查询。

  随后在13年的时候哈佛的谢晓亮教授组开发了一个将PCR指数扩增特性和链置换性完美结合的单细胞基因组扩增技术MALBAC(原理点这里).

  之后又有许多研究组围绕着MDA方法进行了进一步的改进,首先第一个就是ddMDA和eMDA这两个技术,原理都一样,就是将MDA反应放到数千万的液滴之中,这样做可星空体育网站 星空体育首页以极大的提高基因组扩增的均一度,使得不同区域之前扩增的倍数差异大大减小。然后第二个突破就是TruePrime,将原来MDA技术的随机六聚体引物去掉,直接用一个以DNA为模板的引物合成酶来合成引物,由于引物合成酶容易掉下来,这样phi29就可以愉快的在已经合成的引物上继续高歌前行。这样理论上可以保证每个区域都被等机会的扩增到,而且真实扩增均一度效果也不俗。

  随后就有新的进展,有好几个基于Tn5转座酶插入的方法来实现单细胞基因组扩增的方法,基本原理同Tn5建库原理(效率不咋滴)。

  最后,最近谢晓亮教授组又出了一个新方法LIANTI。LIANTI不仅极大的提高了之前Tn5建库的效率,而且全程只使用线性扩增技术来得到最终的单细胞基因组扩增产物。