[0002] 调节性Τ细胞(Regulatory cell，简称化eg)是一群具有免疫抑制效应的Τ细胞亚 群。对人体的免疫系统来说，Treg细胞无疑是把双刃剑。它对维持机体免疫耐受和免疫应星空体育网站 星空体育首页答 稳态具有非常重要的作用，可W通过一系列机制抑制过强的免疫应答，使得机体在自身损 伤最小的情况下有效的清除抗原或病原体。控制化eg细胞的数量与表达可W帮助我们控制 疾病的进程。Treg细胞主要通过两种方式发挥免疫抑制功能。第一种方式是化eg细胞可W 通过分泌异质性细胞因子等发挥免疫调节作用;第二种方式是Treg细胞主要通过细胞与细 胞的直接接触来发挥作用。
[0003] CD4 乂 D25+化eg细胞作为一类调节性T细胞，在自身反应性T细胞的增殖，维持免疫 耐受方面起着重要的作用。现有技术中采用免疫磁珠两步法分离CD4+CD25+Treg细胞，并用 CD4+CD25+Treg细胞专用的完全培养基和一定浓度的化-2培养扩增CD4+CD25+Treg细胞。在 上述现有技术中使用的培养基成本较高，免疫磁珠分选CD4+CD25+化eg细胞需要过柱，操作 繁琐。而且，分离得到的CD4+CD25+Treg细胞的扩增效率低。因此，如何简单分离并提高CD4+ CD25+化eg细胞的扩增效率，是当下研究的热点。
[0004] 有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种调节性T细胞的扩增方法。
[001^ S11、采用密度梯度离屯媒自血液中分离单个核细胞(PBMC);
[0014] 更优选地，所述血液为系统性红斑狼疮患者的血液。系统性红斑狼疮患者因自身 抗原免疫耐受缺失，导致淋己细胞大量活化和增生、自身抗体大量产生和炎性介质的大量 释放。系统性红斑狼疮患者缓解期体内的CD4+CD化+Treg细胞对由免疫过强而引起的自身免 疫性疾病有很好的治疗效果。
[0017] S21、去除厮带中的动静脉和羊膜;将厮带剪成碎块；用0.2m/v%的Π 型胶原酶消 化液厮带碎块2-4h，2000巧m离屯、得到原代的hUC-MSCs;
[0019] 与现有技术相比，本发明调节性T细胞的扩增方法具有如下有益效果：
[0020] 1、本发明将CD4+CD25+化eg细胞在体外与人厮带间充质干细胞化UC-MSCs)进行共 同培养，hUC-MSCs所分泌的生长因子可W促进CD4+CD25+Treg细胞的增殖，增强了扩增效果。 将使用本发明方法扩增后的CD4+CD化可reg细胞做成制剂，回输疗效良好。
[0021] 2、本发明采用分选试剂盒免疫磁珠进行分选，无需过柱，操作简便，节省时间。
[0025] 图3为实施例1共同培养后获得的CD4+CD化可reg细胞的流式检测结果。
[0027] 图5为对比例1共同培养后获得的CD4+CD化可reg细胞的流式检测结果。
[0028] 为了更好的说明本发明，下面结合附图和具体实施例做进一步说明。本发明中所 用试剂或仪器均可由市场购得，使用的检测方法等都是本领域所熟知的，在此不再寶述。
[0032] S11、采用密度梯度离心法自血液中分离单个核细胞(PBMC);所述血液为系统性红 斑狼疮患者的血液；
[0033] S12、使用6曰375邱了》人〔04+〔025可细胞分选试剂盒，按照其说明书所述的步骤操作 自PBMC中分选出CD4+CD化+Treg细胞。
[0035] S21、去除厮带中的动静脉和羊膜;将厮带剪碎至约1mm3大小的碎块；用0.2m/v% (质量体积浓度）的Π 型胶原酶消化厮带碎块2-4h，用含体积分数10%FBS的培养基终止消 化，2000巧m离屯、5min得到原代的hUC-MSCs;
[0039] S33、共同培养14天，每隔2天对细胞进行星空体育网站 星空体育首页补液，所使用的培养基为X-VIV0 15培养 基，其中添加 200-1000
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