（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；
（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正常现象，也可算作没有扩增）。
2、溶解曲线）溶解曲线是判断扩增产物是星空体育网站 星空体育首页否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线）一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间；
（3）出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组DNA污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因所致；
（4）基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。
3、溶解曲线是为了验证扩增产物特异性的，要是溶解曲线是单峰说明产物只有一条，结果较好；要是双峰说明产物不特异，可能存在引物二聚体或非特异性扩增，有可能引物设计有问题。
溶解曲线、可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。2、扩增反应完成后，通过逐渐增加温度同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线，随着反应中双链DNA变性，荧光染料又回复到游离状态导致荧光信号降低。
3、用荧光信号星空体育网站 星空体育首页改变的负的一次导数与温度作图，在扩增产物的溶解温度上有一特征峰（Tm，DNA双链解链50%的温度），用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，
4、溶解曲线是为了观察扩增发出荧光的片段是不是需要的产物。如果溶解曲线做出来只有单峰，且出锋位置是退火温度，那么这个是产物发出的荧光，实验结果有效。
1、扩增曲线：一般来说如果你做双ΔCT法那么你的扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。比如同一种CDNA5倍浓度稀释，那么同一种基因扩增的前提下，5倍浓度模板的CT值会比1倍浓度模板的CT值提前2.3个循环左右，以此类推，当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正常现象，也可算作没有扩增）。2、溶解曲线：溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线，类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间），我说的是一般情况，这个跟扩增片段长短有关系。出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组DNA污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始PCR这之间的时间过长）所致；基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。