如果使用的引物产生了非特异性扩增,那么荧光强度就不是目的条带真实的强度,因此会产生严重偏差。融解曲线我们如何判断本次qPCR扩增的都是目的片段呢?这就需要用到融解曲线。在qPCR循环反应结束之后,系统会进行测定融解曲线度,然后每隔一定时间(1s或者少于1s)测定系统荧光强度,随着温度的升高,dsDNA都解开双链,SYBRGreen都游离之后不发荧光,荧光逐渐下降。那么画出来一个个荧光强度和温度的曲线融解曲线
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