细胞大规模培养技术 培养对象：MMSC细胞 规模：1000L 复苏 1.把冻存管取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体融化1分钟，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。 2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中，1000转离心6分钟。 3.把上清液倒掉，加1ml新鲜培养液把细胞悬浮起来。转移到培养瓶中，加新鲜培养液混匀，静置3分钟，镜检。 4.标好细胞种类和日期、培养人名字，放到CO2培养箱中培养。 种子细胞扩大培养过程 1.25cm2方瓶 2.75cm2方瓶 3.7.5l细胞罐 4.40l细胞罐 5.120l细胞罐 6.500l细胞罐 7.1200l细胞罐 接种密度5万～50万/ml之间 全程严格无菌操作，培养物无微生物污染和其他细胞污染 培养设备与培养形式 贴壁培养设备：搅拌反应器、中空纤维反应器、玻璃珠床反应器等。 培养形式：分批式培养，流加式培养，半连续式培养，连续式培星空体育官方入口 星空体育官网养。 老师操作步骤 老师操作的步骤:从二氧化碳培养箱中取25立方厘米的培瓶,镜检,细胞生长良好,在超净工作台用酒精棉球擦拭瓶口,倒出培养液, 洗2次,倒入胰蛋白酶,放入培养箱中1分钟,在倒入新配置的培养液，分装在4个离心管中。在另外4个管中各倒入新配置的培养液10毫升。 注意事项 (1)超净工作台的准备:实验所需器材与无菌器皿放置,开紫外,通风。 (2)镜检:观察细胞的生长密度,有无染菌。 （3）手消毒，培养瓶口用酒精擦拭，用 洗时，吹打。 （4）胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，从而使粘连的细胞脱壁悬浮。胰蛋白酶处理时间过长对细胞有毒性作用，最适温度37摄氏度。 （5）培养液用前摇匀。 2.B2组的操作步骤 A细胞计数,结果为8万每毫升。 B把10毫升的培养液平均放入6孔,把3毫升细胞液平均放入6孔,再混匀。镜检，标记，放入培养箱培养。（星期一下午3点) C星期二，三镜检观察，细胞不断星空体育官方入口 星空体育官网生长，星期四发现细胞染菌。
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