刚开始做Real time PCR，做了几次，每次都是只有溶解曲线，而没有扩增曲线？大家能告诉我原因吗？
你是不是在扩增的时候没有读板？把你的反应程序传上来看一下呢，我们实验室反应程序基本上如下：
我觉得你没有得到扩增曲线可能是跟你的反应程序有关，你的反应程序只有变性和退火两步，没有延星空体育 星空体育平台伸，产物都没有扩增，荧光信号当然不会增加了．为什么你溶解曲线分析的时候，只做了两个温度呢？做两个温度的溶解曲线是什么样？你能不能把你溶解曲线传上来看一下呢？建议你按我上面的反应程序做一下，祝你好运！
反应程序,我的退火和延伸在同一步里,当目的基因的片段在150 bp以下的时候是可以将退火和延伸合为一步的,我先做一般PCR,跑胶的时候跑出来的.这一步应该没什么问题的.做溶解曲线的时候我是按电脑默认的程序做的,因为我对溶解曲线的设定不熟悉.但是还是可以看得到溶解曲线,所以我认为溶解曲线是做出来了的.
从你的溶解曲线来看，应该说你的ＰＣＲ没什么问题，而且产物比较单一。不知道你用的哪家公司的定量ＰＣＲ仪，因为不同仪器反应程序的设置可能不一样，建议你把仪器的操作手册再仔细研究一下。或者把你所用的仪器型号说一下，或许有其他战友用过相同的仪器，这样就能更有针对性的帮你。
我正在做Q-PCR,用染料的方法,使用的是ABI7300,但是,40个循环跑完之后,要进行溶解曲线分析,但这个仪器我不会用.哪位战友能告诉我具体的做溶解曲线的步骤,先谢了
今天去和实验室里负责Real time PCR的老师请教了下,我仪器的程序设置是没有问题的.她也说自己从来没有遇到过这种情况.但和她的交流中,我似乎发觉了原因的所在,明天再做一次试下.如果是那个原因的话,将和大家一起分享我的经验教训.
我正在做Q-PCR,用染料的方法,使用的是ABI7300,但是,40个循环跑完之后,要进行溶解曲线分析,但这个仪器我不会用.哪位战友能告诉我具体的做溶解曲线的步骤,先谢了
你的扩增曲线，溶解曲线都有，其他问题指的是什？结果分析？分析结果还的把PCR结果导入分析模块中进行（ABI 7300）
PCR 的退火温度，我觉得你还是要做一个温度梯度PCR，然后跑胶，在紫外光下观察，那个温度下P出来的条带最亮，从而找出你的引物的最佳退火温度。至于变性，退火，延伸时间，这要根据你扩增的目的片段的大小来决定。一般来说，Taq酶的扩增速度是1000bp/s，所以你可以根据你的产物大小来决定你反应的时间。
你的扩增曲线，溶解曲线都有，其他问题指的是什？结果分析？分析结果还的把PCR结果导入分析模块中进行（ABI 7300）
你的扩增曲线，溶解曲线都有，其他问题指的是什？结果分析？分析结果还的把PCR结果导入分析模块中进行（ABI 7300）
我觉得原因是你的模板量太高,PCR扩增没有使荧光量相对背景荧光而言没有得到增加,而你的溶解曲线是你的模板的溶解曲线.
你下载附件后解压，2张图可以直接打开，1个文件用SDS软件打开，可以看到条件设置，并可以数据分析（上面发错了，忘了+附件）
你下载附件后解压，2张图可以直接打开，1个文件用SDS软件打开，可以看到条件设置，并可以数据分析（上面发错了，忘了+附件）