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　　最近常常在实验室看见闷头处理数据的小师妹，原本朝气蓬勃的小美眉，这几天跟霜打了的茄子一样。

　　小师妹碰到的引物二聚体问题是 QPCR 实验中最常见的问题之一。其原因是引物对之间的部分序列存在同源性。

　　可以用熔解曲线（又称解离曲线）和凝胶电泳来完成。熔解曲线，是结合染料的双链DNA 解离或“熔解”成单链 DNA

　　如果扩增特异性良好，则解离曲线将出现一个较窄的单峰。而引物二聚体的荧光强度较低，呈较宽较低的“波形”（见师妹熔解曲线°C 左右

　　其他的试剂按比例正常加入，用于监测反应体系中的污染。正常情况下，NTC 孔中不会有扩增。当NTC 孔出现扩增时，则预示体系中可能有污染。（扩增曲线：图来自real-time PCR handbook from ThermoFisher

　　首先，最好在引物设计阶段就能采取简单的预防措施，从一开始即避免二聚体的形成。有许多方法可以减少或消除反应中的引物二聚体.

　　听了师姐的讲解你还是担心做不好，毕竟还有那么多坑呢，常见的不常见的，简直「坑死了。」

　　稍安勿躁，看到这里怎么好让你空手而归呢？丁香实验推出了real-time PCR实验进阶专题，全

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