1 人 NK 细胞体外高效扩增实验探究 作者：黄庆生, 李琦, 黄勇, 商澎, 张明杰 【摘要】 目的: 建立人 NK 细胞体外大量扩增的方法。方法: 采用基因工程方法, 在K562细胞上同时表达IIII5、 IIIII、 4II44I 4 种基因, 构建特定的 K562 工程细胞作为刺激细胞。IIII5、 IIIII 基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合, 4II44I 直接跨膜表达, 使这 4 种蛋白在K562 细胞中表达后锚定于细胞膜表面。其次, 以照射致死的该 K562 工程细胞作为刺激细胞, 以人外周血单个核细胞（P4MC）为扩增培养对象, 通过与 III2 的共刺激作用, 使NK 细胞在体外培养条件下得...
1 人 NK 细胞体外高效扩增实验探究 作者：黄庆生, 李琦, 黄勇, 商澎, 张明杰 【摘要】 目的: 建立人 NK 细胞体外大量扩增的方法。方法: 采用基因工程方法, 在K562细胞上同时表达IIII5、 IIIII、 4II44I 4 种基因, 构建特定的 K562 工程细胞作为刺激细胞。IIII5、 IIIII 基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合, 4II44I 直接跨膜表达, 使这 4 种蛋白在K562 细胞中表达后锚定于细胞膜表面。其次, 以照射致死的该 K562 工程细胞作为刺激细胞, 以人外周血单个核细胞（P4MC）为扩增培养对象, 通过与 III2 的共刺激作用, 使NK 细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。结果: 经过 2I d的刺激培养后, CD56+CD4-细胞数量扩增了(52075)倍。CD56+CD4-细胞的纯度从培养前占P4MC的7%4%到扩增后占总细胞比例的 94%4%。P4MC 中的 T 细胞基本上没有得到扩增, 扩增后的细胞中 CD4+细胞只占 2%I.2%。扩增的细胞具备了 NK 细胞的基本特征和生物学特性, 除了 CD56+CD4-外, 还对扩增的 NK 细胞上 NKG2D、 NKp46、 NKp44、 NKp40、 CD94、 C星空体育登录入口 星空体育在线官网DI5Ib、 CDI5Ia、 NK4I、 NKAT2 等标记进行了验证。细胞毒实验表明, 在效应细胞∶靶细胞为 5∶I 时, 扩增的 NK 细胞的杀伤率达到了 95%4%。结论: 建立的 NK 细