Brdu（5-漠-2-脱氧尿昔）加入培养细胞中,1mg/ml，标记48h。（量:Brdu以铺满整个dish底面为准。）
固定:PBS洗细胞爬片3次，每次5min,在摇床上晃动清洗,4%PFA固定30min。
变性:将固定好的细胞爬片用 PBS洗3次，每次5min,2mol/L的HCl在37C条件下变性
5min，可放置于37C恒温孵箱，应用封口膜把培养皿封好。 （120r/m）
加一抗（尿嚅嚏脱氧核昔Brdu（鼠单抗）1:200），用1%BSA稀释，4度过夜。
加DAPI染细胞核，储存浓度为1mg/ml，应将DAPI完全混匀，可用手弹几下，一般稀释比例
中性树胶封片，荧光显微镜观察，200X镜下取5个视野，计数Brdu阳性细胞与蓝染的细胞
我就是用DDV®己制的，后来我发现很难溶，磁力搅拌器加热搅拌，虽然温度控制在60C以下，也总就是担心多聚甲醛分解为甲醛 ，所以，我就总结为如下：提前配制。
配制方法：称取4g多聚甲醛（粉末状）,置于三角烧瓶中，加入80mlDDW放入37恒温水浴箱，每隔1-2小时摇晃混匀，16-24小时PFA会完全溶解。补充DDW调节PH值。
利用固定剂（通常就是甲醛或多聚甲醛）将细胞固定，使得细胞膜的通透性大大增加 ，并且
利用Triton-X-100使得一部分膜蛋白变性，从而使通透性进一步加强。利用正常羊血清封闭，可以令许多蛋白先与血清内的非特异性抗体结合 ，而特异性的抗体由于动力学的关系可以通
过竞争性的反应与目的蛋白结合 ，这一过程可以保证抗体识别的特异性 。二抗可以特异性识
别一抗的Fc区域，利用二抗连接不同的荧光基团 ，就可以在荧光显微镜下观察到不同的荧光 ，
细胞增殖周期包括G1、S、G2、M4个时期，其中S期就是DNA合成期，细胞内DNA®行半保留复制，各种构成DNA的原料掺入到DNA中。BrdU作为一种胸腺嚅嚏核昔的类似物（其化
学结构特点就是胸腺。密嚏的碱基。密嚏环上与 5位C原子连接的甲基被漠代替），像胸腺嚅嚏核
昔一样可掺入到细胞合成的 DNA中。当细胞处于DNA合成期（S期）而同时又有BrdU存在时，
就会有BrdU掺入新合成的DNA中，只要细胞不消亡，这种BrdU就在胞核的DNA中长期存留。掺入到DNA勺BrdU可通过抗BrdU单克隆抗体在组织切片或细胞爬片上显示。
BrdU抗体比较大，由于DNA双链结构的位阻，BrdU抗体无法直接与双链上的 BrdU结合，
必须先星空体育网站 星空体育首页用使DNA部分变性，这样变性了的DNA单链上的BrdU才能与BrdU抗体结合，因此做BrdU细胞增殖实验一定要变性 ，当然变性的方法包括酸解，热解等，但就是要注意变性的程
度也很重要。建议采用EdU细胞增殖检测方法，无需变性，无需酶解，无需抗体，小分子染色，3小时完成实验。EdU就是一种胸腺嚅嚏核昔类似物，能够在细胞增殖时期代替 T渗入正在复
制的DN子，通过基于EdU与Apollo?荧光染料的特异性反应检测 DNAM制活性，通快速、
更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞与组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。
该方法能对细胞周期进行迅速而稳定的测量，而且标记BrdU的细胞只要不受到紫外线
照射，对细胞本身没有功能损害。该技术可应用到跟踪检测移植细胞的存活、分化与功能状态。
DAPI为4，，6二月米基-2-苯呵噪（4，6-diamidino-2-phenylindole），能与双链DNAJ、槽，特别就是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DN昕列中。当它与双链DNA结星空体育网站 星空体育首页合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA吉合则无荧光增强现象，因此就是一种简易、快速与敏感地检测DNA的方法。DAPI的荧光强度虽较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst;其特异性较漠化乙嚏（ethidliumbromide，EB） 与碘化丙嚏（propidiumiodide，P1）高。DAPI
的中文名称就是4,6-联豚-2-苯基呵噪，就是一种常用的荧光染料，其作用机理与漠化乙锭（EB）等染色剂的机理类似：它们与DN故螺旋的凹槽部分可以发生相互作用 ，从而与DNA勺双
链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰就是 358nm而散射峰就是461nm，正好UV（紫外
光）的激发波长就是356nm，使得DAPI成为了一种常用的荧光检测信号。