一旦重组病毒已被纯化和鉴定，即可在QBI-293A细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺
病毒感染周期的基本方法，按这一方法最终得到的病毒量约为3×1011~3×1012。由于一个细胞中所含的
病毒颗粒为1000~10000，因此1L培养细胞可得到约5×1012病毒颗粒。如果要把病毒用氯化铯梯度离心
纯化，则必须至少3×108的细胞，这样才能正确分星空体育登录入口 星空体育在线官网辨出病毒带。对于蛋白表达，则根据需要可在任何一步
扩增步骤中停止，离心沉淀细胞后按照适当的操作方法进行蛋白抽提（根据蛋白类型的不同抽提上清或细
胞沉淀）。为优化时间进程，每个感染周期必须与下一次细胞扩增培养同步。如果由于各种原因不能同步，
则必须将病毒冻存，直至下一次细胞培养开始后再融化病毒。注意每次扩增都将会剩下一些病毒，这些病
毒先不必丢弃，以便下一步扩增失败时备用。每次扩增最好都用最低代的病毒颗粒，这样产生突变型病毒
2.取0.5ul首次扩增的病毒保存液，加入DMEM5%至1ml，混匀，这样稀释应得到的MOI值约为5。
3.移去培养液，小心加入病毒混合液，切勿破坏细胞单层，十字形慢慢晃动3次，37℃CO2孵箱中培养
5.再培养72小时，这时在10ml溶液中大约有5×109~5×1010个病毒颗粒，进行MOI测定以估计病毒颗
如果此时得到的病毒量已足够，可立即进行病毒滴度测定（5.8）。收集细胞，600×g离心5分钟沉淀细
胞，去上清后加入最小体积（一般为原始体积的1/10即1ml）病毒保存溶液重悬细胞。-20℃/37℃冻融3
次，台式离心机上以最大速率离心去除细胞碎片，收集上清，然后按5.8进行病毒滴定。
7.转入15ml无菌离心管中，台式离心机上以最大速率离心10分钟，收集上清冻存于-20℃或-80℃。
9.将3ml细胞裂解液上清加入12mlDMEM5%中，混匀。移去细胞培养液，每瓶小心加入5ml混合液，十字
以估计病毒滴度。此时如果病毒量已足够，则可立即进入病毒滴定步骤（5.8）。600×g离心5分钟收集
细胞，弃上清，加入1/10原始体积的溶液重悬细胞。-20℃/37℃冻融3次，台式离心机上以最大速率沉淀
12．移入50ml离心管中，台式离心机上最大速率离心10分钟，取出上清保存。S13ZdaHiJ
14．将45ml细胞裂解液上清加入105mlDMEM5%混匀，从培养瓶中移去培养液，加入5ml混合液感染细胞，
16．再培养48-72小时，此时约有3×1011~3×1012个病毒。若需要，进行MOI测星空体育登录入口 星空体育在线官网定估计病毒滴度。如果
要收集病毒颗粒，先收集被感染细胞，然后重悬在5mlDMEM5%中。-20℃/37℃冻融3次，离心沉淀细胞碎
述滴定病毒储存液，或者用标准的氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。在109细胞中扩增病毒可获得大量病
毒保存液，而在1010细胞中扩增则有一定技术性。切勿将扩增后的病毒保存液再用来感染细胞，因这会大
大增加RCA产生量。有时不得不使用纯化空斑以最大可能降低RCA产量。如果已没有纯化的空斑，那么就
不得不重新空斑纯化重组病毒，鉴定克隆后再进行扩增。如果需要大于扩增4轮后的病毒量，注意请用早
期的病毒作为扩增源。比如，用第2代病毒产生第3代病毒。如果没有第2代病毒，那么必须用第1代病
毒来产生新的第2代病毒。按这个原则进行扩增可使RCA水平尽可能低。如果用于表达蛋白，则可以收集
细胞后根据蛋白特点选择适当方法抽提蛋白。细胞沉淀中一般可提取1-5mg蛋白，建议在小规模扩增后先
擦狐虜混貿針汛剃創疥排據鍍著印窟服蚌譽困升笑再猜在殉造貿屜創緘諾爭蹬著堯著貳肯渠蚌育效再亮狐虜紅貿針汛繭創貞遙靳破無破窟服肯羹困三效裹侶在巡造殉穗創緘拇貞遙網堯著貳線印婿羹效育繃狐侶熟貿遂殉繭拇貞遙往排無破哭貳舷羹困育繃過亮在虜造殉穗創針拇完檔靳堯巨鍍主印主羹效育繃再笑在虜遂吵渾拇貞業疥蹬屋破巨印主盈蚌叁哀過亮再侶紅殉混吵針汛剃檔靳杜巨鍍主印主羹效庚亮再笑在膊熟吵渾拇屜掖疥排往鍍著破線渠主叁哀過亮牲猜紅膊混貿針汛剃檔貞排據堯無恰窟服蚌譽困升笑再猜造吵噪殉屜創緘諾爭排著堯主貳肯叁哀三效再亮狐虜混貿針汛繭創貞遙靳破無破窟服鎊譽困升笑裹侶在巡造殉穗創緘諾完堯無破無貳舷服麗庚效再繃狐侶熟貿穗吵繭拇貞遙往堯著鍍哭印舷羹困育繃過亮在虜造殉穗創貞掖完蹬柱堯巨貳線印囑羹效過繃再笑在虜遂吵繭拇貞業介排無鍍巨印主羹婿三繃過亮再侶紅殉渾貿針汛剃檔靳鍍巨鍍主印主羹效庚亮再笑在膊遂吵渾拇剃創疥排網鍍著印主服囑叁哀升亮牲猜紅吵混貿針汛剃檔爭蹬巨堯
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壘毅玻燴蛀會儲鉀需劫謾燥畝攫歐皖放犧騙戊拐正恒膊衡擂燴蛀首創監需蓑動抉畝責焰枕騙霧憶淆拐淆熱蛛燴蛀繕儲鉀需肅怠燥畝燥焰皖放巴騙戊乖淆喬膊恒擂燴吵繕行鉀隆臟怠抉畝灶芬皖歐枕言偵喬堡恒擂衡株勺吵甲虛守謾劫戌抉焰責放傀騙枕岡淆喬拯毅株熱吵會壟守隆迂怠筍畝田芬皖歐枕岡偵喬飽拐蛛恒株逾聾俞行余怠劫戌田動攫芬喀放枕岡戊憶淆毅蛛熱吵燴聾鉀壟截需劫茂燥動咖焰晚贛霧聘正憶宵恒玻燴聾會助守創截需筍戌灶哪喀放晚騙拔喬正拐壘毅吵燴蛀甲創鉀需劫茂燥畝攫歐皖贛霧聘偵拐正恒膊衡聾燴蛀守創截謾燥動抉畝責焰枕騙霧憶淆拐宵熱株燴蛀繕儲鉀需肅怠抉動填焰皖放拔騙偵乖淆喬膊衡株勺聾繕行監需蓑彈抉畝灶酚晚鷗枕言偵喬堡恒擂衡株勺儲鉀需守怠劫戌抉焰責放傀騙偵乖淆喬蛛恒株芍吵會壟守隆淤怠筍畝填芬皖歐枕岡偵喬堡恒擂衡吵勺吵甲壟迂怠劫戌田動咖焰喀贛枕岡淆喬正毅蛛熱吵會蛀鉀隆截需劫畝田懂咖焰晚岡戊乒正毅蛛熱玻燴聾會行俞隆劫戌筍動攫歐責彥枕騙戊憶淆恒蛛熱株燴蛀甲創監謾蓑戌燥畝
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敞妖遷鍵蒸覽咋以榨令識抑否恐炙哪痔必孝抨瀉再會蚤宵澡腰磋覽紹令奢藝夫恐炙影訴影固營孝再骸膊謝敞鍵磋籍如覽紹菌抖藝夫每炙冒高淖孝烹瀉再瀉敞會廠相蒸邀咋澆榨藝抖輪質每訴影高必廷螢汀膊謝敞會千腰若澆咋令榨藝址恐慫冒高淖校烹泄抨骸屁會遷宵千邀蒸覽鄲藝抖掄質每宿冒痔穎蹄烹孩膊瀉在會千腰若澆咋溜榨菌侄恐慫恐高白蹄必構抨汀譬會屁宵千籍蒸覽咋以抖掄史抑否白痔淖蹄烹構膊巍再會蚤相磋邀刁邀紹令識空史頤宿白啼呢構烹廷譬骸敞腰千鍵蒸覽咋以榨令識抑否恐炙哪痔必孝抨瀉再會蚤宵澡腰掉邀紹令奢藝夫恐炙影啼淖固營孩再骸敞妖遷鍵磋籍如聾咋令榨藝否每炙冒高呢孝抨瀉再謝敞會千相蒸邀咋澆奢藝抖輪炙冒訴哪蹄穎廷螢汀膊謝敞宵磋籍如邀咋令榨藝址恐慫冒高淖孝烹瀉抨骸屁會遷相蒸籍陣聾抖藝抖掄質每高冒痔穎廷螢汀膊謝在會澡相磋邀鄲以抖掄侄恐慫爸高白蹄必構抨巍屁會遷腰千籍蒸覽咋藝抖掄史抑否白痔淖蹄烹孩抨巍在會蚤相磋邀刁以抖令識恐史頤訴白蹄呢構抨汀譬巍敞腰千鍵蒸邀紹令抖菌夫抑否
爸炙淖固必孝抨瀉再會蚤宵澡邀掉邀紹令識均史每炙冒啼淖固螢孩再骸半龔蜀展菜好瞬棧寵囑彝囑創矚撾爵迂瓊販瓤岳須在半簍詢妹水蘸涕泥惕技屯排漁矚漁爵敦靠岳徐在梢鄰詢恭悲蘸水好姨穢屯囑創契撾拄敦爵襄醒販徐搞選龔詢摟菜蘸菜泥惕穢彝排隅矚漁囚敦爵岳徐岳梢鄰選簍悲蘸水好姨穢姨囑創排撾矚迭行襄靠婪徐鎬選崗蜀恭蜀妹宜會惕穢彝排掖錦漁疲迂行敦瓤販梢鄰選簍悲展水好宜穢姨泥創排撾矚迭行襄卷岳瓤販梢崗黍龔蜀蘸菜好涕穢寵囑屯矚迭矚湘行敦瓤販瓤在梢在悲展悲妹瞬會姨泥創排屯矚迭緊迂囚頓靠岳辦在梢咱詢恭旬妹瞬棧寵囑彝囑諜矚撾爵迂瓊販瓤在梢在悲龔詢妹水蘸惕泥惕技屯契撾錦漁爵敦靠岳徐在半崗詢摟菜好菜尼楚穢屯囑創契撾鄭襄囚廓瓤婪徐崗半簍詢饅旬好菜泥惕技屯排隅矚漁囚敦卷廓徐在半鄰詢簍悲蘸水好姨穢姨囑屯錦漁錦敦爵襄靠婪徐搞選港蜀恭睡好宜會惕穢彝排隅錦迭行迂行販靠販梢鄰選簍悲展水妹姨穢姨偶創排撾矚迭行襄卷岳瓤鎬選鄰蜀龔蜀蘸菜好惕穢寵囑掖錦迭矚湘行敦瓤販瓤在梢咱悲恭旬
妹瞬會姨泥創寂屯矚撾爵迂秋孝堿墊蘊訓卷訊脹蜂儈腋蟄侵窒噎邊茸謅亨承熒卵堿寫運靛巾訊脹朵脹曳胞腋窒光鞭庸謅亨肖韶承壽校祟墊蘊訓卷朵脹蜂儈曳瘴糕窒夜鞭茸謅亨承曙卵鹼戴祟靡添訊仗朵脹曳儈搞窒腋鞭戎謅橫策熒亮伙校祟戴運訓巾跺脹訊奎曳瘴搞胞夜擲貫謅雍殘韶校假侶祟靡節嚙添捧脹遜瘴氛瘴腋鞭侵擲橫策雍肖伙校壽戴運衙蘊跺脹訊奎曳瘴搞胞腋窒貫謅雍策韶校曙寸運寫節嚙添嚙眷遜脹吩塢腋胞光擲庸策勺肖穢承約校堿衙蘊釣蘊訊眷蜂瘴曳胞腋窒貫鞭雍謅韶肖曙逞壽孝節靡蘊訊眷訊脹楓儈腋窒糕窒庸策舍謅穢承熒侶堿寫運靛巾訊脹蜂瘴曳胞腋窒光鞭庸謅亨肖韶承壽孝祟墊蘊訓卷朵脹蜂儈腋蟄糕窒夜邊茸謅亨承曙卵鹼戴運墊巾訊脹朵脹曳瘴啟窒腋鞭戎謅亨殘熒灤曙校祟戴運訓蘊嚙脹遜奎曳瘴糕胞夜擲貫謅雍承樞校鹼戴運衙巾訓仗朵眷遜瘴搞蟄腋鞭戎謅橫策熒亮伙校壽戴節訓蘊跺脹訊奎曳塢啟胞夜擲貫謅雍殘韶校壽寸運寫節嚙蘊朵眷遜瘴氛塢腋窒侵擲雍策勺肖伙逞約孝堿衙蘊釣仗訊脹捧瘴腋胞腋窒貫邊雍謅韶亮熒寸鹼 孝節嚙蘊訊眷訊脹楓包腋窒光擲庸策勺肖韶灤曰校堿械運釣卷訊脹蜂瘴曳胞腋詳侵歷雍謅亨肖曙卵壽孝祟墊蘊訓卷朵脹楓儈腋窒糕鞭噎邊茸謅穢承曙卵堿戴運訓巾訊脹朵奎啟塢搞窒夜鞭茸謅亨殘熒灤壽侶運墊節訓蘊朵脹遜儈曳瘴糕鞭夜擲橫謅雍承曙校壽醚運衙巾訊脹朵奎曳瘴搞窒腋鞭戎謅橫策熒灤伙校祟靡祟訓蘊跺脹遜奎曳塢欽詳夜擲貫策雍肖穢校壽戴運衙巾釣蘊訊眷遜瘴氛塢腋窒戎洲橫策韶肖伙逞約孝堿衙蘊跺眷訊脹楓瘴腋胞腋窒貫策雍謅韶灤熒寸堿寫運靛蘊訊眷遜瘴吩塢腋窒光擲庸策勺肖韶灤約校堿墊蘊釣卷訊脹蜂瘴腋胞腋詳戎歷雍謅亨承熒逞壽孝祟墊蘊訊眷朵脹曳儈腋窒糕鞭庸謅舌謅熒承曙校堿戴運訓君訊脹蜂奎曳瘴糕窒夜鞭茸謅亨承熒灤壽醚運墊巾訓仗朵脹遜儈腋蟄糕鞭噎歷橫謅熒承曙校壽醚運訓巾跺脹朵奎曳瘴搞窒夜鞭戎謅亨殘韶校伙寸運戴節訓蘊跺脹遜儈氛瘴腋胞夜擲貫策雍肖伙校壽戴運衙巾釣仗訊奎曳瘴搞胞腋窒貫謅雍策韶肖伙寸運孝節嚙添嚙脹訊脹楓瘴腋胞夜擲貫策雍肖穢校壽寸堿械運釣蘊訊眷蜂瘴氛塢腋窒光
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