在染料法定量扩增实验中，熔解曲线发挥着关键作用，它可以帮助我们判断反应是否有非特异扩增。
首先我们需要了解染料法荧光标记的作用原理。SYBR Green I是应用最广泛的染料法荧光标记，它可以广泛地结合到DNA双链的小沟中，从而发出比游离状态下强1000倍的荧光。因此，荧光信号的强度可以反映体系中双链产物量的变化，在整体反应过程中，荧光信号的变化可以描述产物积累的过程。
那么熔解曲线是如何产生的呢？随着PCR的进行，双链产物的不断增加，嵌入到双链中的荧光分子也不断增多，荧光信号逐渐增大。在扩增结束后，体系内的双链产物最多，荧光信号强度达到一个最高值。之后我们设置一段由65℃逐渐升温到95℃的程序，随着温度逐渐升高，DNA双链逐渐解链为单链，嵌入到双链中的荧光染料分子星空体育 星空体育平台也会逐渐脱落下来，荧光信号强度逐渐下降。在某段温度时，双链迅速而大量地解链，荧光信号强度骤然下降，在这段温度中，一半的双链解链的温度我们称为熔解温度（即Tm值）。最终，DNA双链完全解链为单链，荧光值下降为一个本底水平。这一整体过程中的荧光信号随温度变化的曲线就是熔解曲线，称为原始图谱。该图谱做负导数换算后得到熔解曲线的导数图谱，导数图谱会出现熔解峰，熔解峰对应的温度就是Tm值。
不同的产物按照其GC含量，片段大小，盐离子浓度的不同，其对应的Tm值也是不同的。所以，不同的产物在导数图谱中表现为不同位置的熔解峰。通过观察熔解曲线的形态，就可以判断PCR反应是否只扩增出了单一产物，是否有非特异结果出现。
●采用化学修饰和抗体修饰的双热启动聚合酶，并辅以K+和NH4+平衡体系，扩增效率高，重复性好。
●添加独特的H-Bond因子，可消除弱氢键导致的非特异结合，进而一定程度上消除非特异扩增，使定量结果更准确。
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