200目尼龙网纱过滤，1200 rpm离心10min，弃上清 将获得的细胞在37℃、5%CO2培养箱中培养24h，弃去未黏附细胞
枸橼酸钠法：先配制2%枸橼酸钠，取0.15-0.2ml加于1ml血液中即 可抗凝；
体液标本采集： 在局部70%酒精消毒灭菌后，用灭菌注射器穿刺入体腔 （如胸腔，腹腔，关节腔等）抽取液体样品。
人标本：可采取无菌手术法切取少量所需的组织或器官（活检和手术）。 大量的动物组织：先麻醉或处死，浸入70%酒精中，使毛皮全部浸湿，从腹
中线剪开皮肤，注意不要剪开胸腔或腹腔。将皮肤向上、下撕开分离并向上、 下翻开，暴露胸腹部的筋膜，用生理盐水洗净黏于筋膜上的断毛，以碘酒和70% 酒精消毒后，更换一套消毒灭菌的器械，剪开胸腔或腹腔，无菌采取所需器官。
磁性微珠是20世纪80年代初以高分子材料和金属离子（如Fe3O4） 为原料聚合而成的一种以金属离子为核心、外层均匀地包裹高分子聚合 体的固相微粒，即磁性微珠。在液相中，受外加磁场的吸引作用，磁性 微珠可快速沉降。以磁性微珠为载体，包被上针对某种细胞表面抗原的 特异性抗体即可制成免疫磁性微珠。
可以了，而且流式可以双通道分选，也就是同一时间分选出两种细胞， 流式分选成本比磁珠低。
分选后细胞适用于后续实验：分选后适用于细胞 培养和体内实验，分选得到的标记和未标记细胞 组分均可回收利用。
从细胞到分子分选：不仅可以分选各种细胞，还 可以分选转染细胞、亚细胞物质、蛋白质、DNA、 RNA及mRNA。
加入Dispase（0.6～2.4单位/ml 溶解在无钙镁的平衡盐溶液）
后，利用磁力的作用，使与致敏结合的细胞与其它物质分离，达到纯化、 分离的目的。
混合液中分离出靶细胞，阴性分离是利用磁珠去除无关细胞，使靶细胞 得以分离。
先用Hanks液，再用含20%小牛血清的RPMI-1640液冲洗平衡尼龙纤 维柱，冲洗液尽量流净。
将尼龙柱预温37℃，再用配制的单个核细胞悬液2ml装入尼龙纤维 柱，不使流出，37℃温箱内静臵l小时。 取下注射针头，用预温37℃含20%小牛血清的RPM I-1640培养液冲 洗尼龙纤维柱，洗出者即为未黏附的T淋巴细胞。 从注射器内取出尼龙纤维，在4℃的RPMI-1640液内漂洗，并轻轻挤 压，将黏附的B细胞洗脱收集（B淋巴细胞中混有的单核细胞可用贴 壁法将其分离）。 收集的T、B淋巴细胞可分别用Hanks液悬浮，洗涤，离心（250g， 7min），并重复洗涤3次。计算活细胞，计数悬液中的细胞数后制 备所需浓度的T和B淋巴细胞悬液。
肝素法：按每ml血液约用0.1-0.2mg肝素（即5%肝素溶液2-4µ l）； 草酸盐法：取草酸钾0.2g，草酸铵0.3g，加双蒸水10ml溶解后，取 0.2ml放入5ml的试管中，使其干燥。若采用5ml以下的血液可直接 注入此试管中，轻轻摇晃；
操作简便、快速：消毒方便，手动分选30分钟内 完成，autoMACS分选2.5-10分钟之内完成。
在去除不需要的组织后，使用无钙镁的平衡盐溶液清洗组织块， 重复清洗2到3次。用无菌的解剖刀和剪子把组织切成 1-2mm3小块。
将盛有组织碎片的容器臵于冰上。加入0.25％溶解在无钙镁的 平衡盐溶液中的胰蛋白酶（100mg组织加入1ml 胰蛋白酶）。
在4℃孵育6到18小时，使胰蛋白酶尽可能渗透进去 移弃组织碎片中的胰蛋白酶，在37℃孵育包含残留 胰蛋白酶的组织碎片星空体育网站 星空体育首页20到30分钟 在组织碎片加入热的完全培养基，用移液管轻轻地分散组织。如果使
放血处死动物，无菌取胸腺和脾组织，去除脂肪和结缔组织，放入盛 有含5%小牛血清的D-Hank’s液（不含钙镁，含青霉素200kU· -1、链 L 霉素200mg· -1）平皿的网纱中（200目） L 用注射器针芯轻轻碾碎胸腺和脾组织，使单个细胞经网进入溶液中 溶液移入离心管中， 1200 rpm离心10min，弃上清， D-Hank’s液洗涤 细胞，加入DMEM培养液计数和调节细胞浓度，进行培养
用流式细胞仪进行分析。在散射光参数图上选取淋巴细胞群，在荧光 参数图上选取绿色荧光阳性的细胞进行分选。
血中单核细胞的分离： 利用细胞在培养过程中贴壁时间的早晚不同进行细胞分离
多将悬液放入12cm直径的培养 单 个 核 细 胞 悬 液 皿中，于37℃培养箱中静臵3060min。此时单核细胞贴壁，而 淋巴细胞尚未贴壁，倾出未贴 壁细胞，并用Hanks液轻轻冲洗 用Hanks液强 力冲洗吹打与 震荡，将贴壁 计数后
免疫磁珠分离细胞已被广泛应用于人类各种细胞的分离，如T(CD3)、 B(CD19)淋巴细胞、内皮细胞(CD34)、造血祖细胞(CD34)、单核/巨噬细 胞(CD14)、胰岛细胞(胰岛GK和GLUT2（葡萄糖转运子）) 、多种肿瘤 细胞等。
用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成1-2mm3小块，用Hanks平衡液 （HBSS）清洗组织碎片几次
人 静脉穿刺、耳垂或手指针刺采血； 小动物（大鼠、小鼠） 剪尾法、眼眶采血、心脏穿刺 法、断颈取血或股动脉放血。
利用细胞的相对密度或大小不同而沉降速度不同的原理，以自然沉 降法结合不同速度的离心沉降法将不同的细胞分离。 抗凝血，室温或37℃下直立静臵30-60min，红细胞沉降至下层，中 间乳白色薄膜层为白细胞及血小板，上层为淡黄色血浆。也可将抗凝血 与3%明胶（经灭菌消毒）等量或3︰l量混合于离心管中，直立静臵30-
将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用 的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离 细胞法。
肌组织分离成单个细胞，用培养基制成心肌细胞悬液，在体外适宜条件 下使之生长繁殖，并保留其结构与功能特性。
分选细胞常用于细胞亚群进一步的功能研究，因此，整个过程均需 要严格无菌操作，流式细胞仪进行无菌冲洗。
由于喷嘴孔很小（约70～100μm），分选前用30～40μm孔径的滤网 过滤细胞悬液，以免堵塞喷嘴。
无菌取滑膜组织，去除脂肪、纤维等，用不含钙镁的D-Hank’s液（含 青霉素200kU· -1、链霉素200mg· -1）反复冲洗后剪成1~2mm3小块 L L
臵于加入2ml含10%胎牛血清、0.4%Ⅱ型胶原酶的DMEM培养液的培 养瓶中，在37℃、5%CO2培养箱中消化2h，每隔10min吹打1 次。