ＣelｌCouｎtingKit-８（简称CCK—８)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析.
其基本原理为:该试剂中含有WSＴ－8【化学名：2-（2-甲氧基-4—硝基苯基)—３—（４
—硝基苯基）—5-（2，４—二磺酸苯）-２H—四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基
—５-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1—MetｈoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具
有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Ｆorｍazａndye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数
ＣCＫ8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生漏
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约１00ｕl细胞悬液，同样的样本
３、３7℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养２—４小时,如果不需要贴壁，
4、加入１0uｌＣCK８：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带
来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀.或者直接配置含１0％CCK8的培
养基,以换液的形式加入。ﻭ5、培养1—４小时:细胞种类不同，形成的Fｏrｍａzaｎ的
量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养,以确认最佳条件。特别是血液细胞形成
6、测定450nm吸光度：建议采用双波长迚行测定,检测波长４５0-４９0nm，参比波长
2、接种到９6孔板中：根据合适的铺板细胞数,每孔约１00ｕl细胞悬液，同样的样本可
3、3７℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2—4小时,如果不需要贴壁，这
5、３7℃培养箱中培养：加入毒性物质的培养时间，要看毒性物质的性质和细胞的敏感
性,一般要根据细胞周期来决定，起码要星空体育登录入口 星空体育在线官网一代以上的时间。ﻫ６、加入10ulCＣK8:由于
每孔加入CＣK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻
轻敲击培养板以帮助混匀.ﻫ７、培养１-４小时：细胞种类不同，形成的Formazaｎ的量
也不一样。如果显色不够的话,可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的
8、测定450nm吸光度:建议采用双波长迚行测定,检测波长４５０-４9０nm，参比波长6
若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入１0μL0。1M的HCL溶液或者1%ｗ
／vSDＳ溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会
养基,并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基）,去掉药物影响。当然药物
影响比较小的情况下,可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸
当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,00０个/孔（１00μｌ
培养基）。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2，５0０个
酚红和血清对CＣK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光
ＣCＫ８可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过
CCＫ—8在０—５℃下能够保存至少6个月,在—２０℃下避光可以保存1年。
当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥収,由于体积不准确而增
在培养基中加入ＣCＫ8，培养一定的时间,测定4５0nm的吸光度即为空白对照.
在做加药实验时，还应考虑药物的吸收,可在加入药物的培养基中加入ＣCK8，培
金属对ＣCK-８显色有影响：当终浓度为１mＭ的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会
抑制5%、15％、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的线%抑制.