在PCR实验过程中,我们经常会遇到各种奇特的扩增曲线,如何正确解读这些曲线并且做出恰当的解决方案是我们一线实验者需要练就的基本功。看完下面的文章,教你如何处理PCR实验过程中容易出现的异常曲线,助你在今后的工作中游刃有余.
解决方案:手动设置基线。将Baseline End设置为“扩增信号出现的前一个循环”即,图片展原始为26,将其设置为20,点击OK即可恢复正常曲线:荧光定量PCR实验结果中无Ct值出现
(1)分液不准确,检查检测后的反应管可发现管内的PCR反应液量明显少于正常管;
(2)反应管气密性差,反应过程中溶液蒸发引起探针浓度增加,导致曲线呈斜直线状。
(1)分液均匀,上机前检查八连管液面是否在同一水平线)八连管盖盖严,上机前检查是否有缝隙。
(2)排除污染原因后复检样本,如果复检后曲线为阴性直线则说明之前的末尾起跳为非特异性扩增,如果复检后曲线仍与之前一致则说明末尾起跳表示该样本中待检病毒核酸的浓度偏低。
(2)如果尖峰向下,可能是卤素灯老化所致发射光源不稳定(指卤钨灯光源的激发器)
(3)如果是单一的孔位出现尖峰,除了考虑仪器或者孔位问题外,还要考虑反应体系是否有气泡所致。
判断扩增曲线.曲线拐点清楚,特别是星空体育网站 星空体育首页低浓度样本指数期明显,扩增曲线整体平行性好,基线平而无上扬现象,低浓度样本扩增曲线.曲线指数期斜率与扩增效率成正比,斜率越大扩增效率越高。
