细胞原代培养方法
(1) 器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡23秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内)再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取肝脏，置平皿中。
(2) 用Hanks液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
(3) 用手术剪将肝脏剪成小块(1mm2)，再用Hanks液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
(4) 视组织块量加入56倍的0.25%胰酶液，37℃中消化2040分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
(5) 加入35ml培养液以终止胰酶消化作用(或加入胰酶抑制剂)。
(6) 静置510分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
(8) 加入Hanks液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
(9) 加入培养液l2 ml(视细胞量)，血球计数板计数。
(10) 将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。
上述消化分离的方法是最基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同(如胶原酶，透明质酶等)。
自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃静置星空体育官方入口 星空体育官网35小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中(勿使组织漂起)，37℃继续培养。
(2) 加入1-2 mL 0.25%的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准)静置2-10min(显微镜下动态监测) 。