反应结束无扩增曲线出现这个问题的常见原因，主要可以归结为以下 5 种：
程序中未设置信号采集步骤：注意啦，两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在 72 度延伸阶段。
引物降解：长时间未使用的引物应先通过 PAGE 电泳检测完整性，以排除引物降解的可能性。
模板浓度太低：这个大家减少稀释度重复实验就可以了，一般来说，未知浓度的样品先从最高浓度做起。
溶解曲线）杂峰在主峰之前，Tm 约为 70 - 75℃一般为引物二聚体
重新设计引物；杂峰为引物二聚体，荧光定量 PCR引物二聚体主要是由于体系内引物星空体育登录入口 星空体育在线官网与引物纠缠比引物与模板结合更容易导致的，可以尝试提高模板浓度、退火温度或者降低引物浓度来进行改善；另外，当目的基因表达量极低时，染料法容易形成引物二聚体产物影响实验结果，此时，建议使用探针法定量。（2）杂峰在主峰之后，非引物二聚体上图这种情况就是非特异性扩增，可能是引物特异性不好引起的，也可能是空气中有气溶胶污染所导致。
大家可以先增加退火温度再试试看，如果星空体育登录入口 星空体育在线官网没有改善，那么就需要重新更换引物啦。为了避免这种麻烦，小编建议大家在进行荧光定量 PCR实验之前，就对自己的引物做一个特异性验证。另外，每次试验的 NTC（no template control）是一定要做哒！（3）只有引物二聚体，无目的条带如果扩增片段过短（小于 80bp），那么仅通过融解曲线就很难区分引物二聚/目的条带。
另外，也有可能是荧光定量 PCR扩增效率低或者没有扩增，体系里边只有引物纠缠成的二聚体了。总之，产物长度建议大家还是设置在 100 - 200 bp，不要太短了。联系我们联系人：高小姐手机：