行方法 100激升/孔 CCK8——细胞增殖曲线微升上清吸到6.排气泡(针头 的6次方/ml) 升,37度培养1-4h 7.酶标仪450nm测定 上清 平均值,将独立重复3次 体,并在细胞孔中加100微 1个和 1-4h 升培养基继续培养 继续培养 加培养基 重悬重 20个礼 9.graphpad画折线 先雪落均匀再测 治液 8.excel整理数据,复孔末 3次独立 本次器 困孔防止蒸发 10XCCK8 细胞 3意100l 在相同时间重复步骤 孔中的气泡) 的数据导入graphpad 培养 排泡 设计数结果为10加到2.2ml培养基中,96孔板每孔 用酒精灯烧热,扎 +1ml培养基重悬 2.细胞计数(假3.细胞接种:将66微升细胞悬液 10%CCK8溶液100微 新的96孔板,弃掉剩余液 酶标仪 100微升,每组5副孔),PBS补周 3000个细胞/孔 OD值,记为0d.每天 之前 90+110+120+80×102=102 重多实验 1.细胞沉淀中 结里 弃液 3次 4.第二天,弃液,每孔 sh2sh3 打开社杨志测量
师姐，我想问一下，第5步的上清可以用排枪转移吗？按原理上看，吸出来的cck8（养的贴壁细胞）应该不会在新96孔板上继续颜色变深了吧？（我们这边不加终止液的[泣不成声]）留在原96孔板里的部分cck8会对后续的细胞生长有影响吗？如果有，我可能打算全部吸掉再加新的培养基，但我又有一个矛盾的点是如果吸出来的cck8会继续变颜色，我是先加培养基到96板里还是先去测吸光度啊？总之就是先去测吸光度，还是先去加培养基的疑惑[泣不成声]，打扰师姐了[流泪][流泪][流泪]
3.关于留在原96孔板里的部分cck8对后续细胞的影响？ cck8本身可能会对细胞产生一定毒性，尤其是在较高浓度的情况下，如果残留的cck8较多，可能会影响细胞生长和活性4.先加培养基还是测吸光度？ 应该先测吸光度 然后再加入新的培养基 这样可以确保在测量吸光度时 cck8跟细胞的反应已经充分进行 能得到准确结果为什么不先加培养基？ 如果先加入培养基 可能会稀释cck8溶液 影响颜色变化和吸光度的测量 加入培养基后，细胞的代谢状态可能会发生变化 影响测量结果的准确性
原理：WST-8（四唑盐）是 CCK-8 的主要成分，呈粉色。在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下被线粒体中的脱氢酶还原为黄色甲臜类染料（Formazan），并释放到细胞外溶解在培养基中，生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在 450nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量
1⃣细胞要充分消化，而且一定要铺匀，还不能过密，一般3000个细胞/孔，不同细胞还需要调整
2⃣关于CCK8孵育1-4h，具体时间可以做预实验摸索，得到CCK8最佳反应时间
4⃣最好用双波长检测，检测波长450nm，参比波长600nm，参比波长可以过滤掉因为液体浑浊，孔板底部不干净带来的测量误差（OD450-OD600即可，但是我比星空体育 星空体育平台较懒，没测参比波长）
6⃣其实96孔板不太容易污染，可以直接用培养细胞的96孔板进行测定，尽快测定，测完盖上盖子放回即可，但是我们酶标仪距离培养室有一定距离，所以我会把上清吸到新的96孔板中（洗一洗晾干下次接着用它测抠抠搜搜）
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