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细胞增殖检测方法大全(下)——荧光染料法
发布:2025-03-16 12:45:28 浏览:

  细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础,是生物体的重要生命特征。细胞通常以分裂的方式进行增殖。细胞毒性(cytotoxic)是由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事星空体育登录入口 星空体育在线官网件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。

  根据您实验室现有的实验条件,可选择使用多功能酶标仪的化学发光发检测,也可选择利用荧光显微镜或者流式细胞仪的检测。最常见的细胞增殖和毒性的检测方法有以下几种:

  上次,我们已经介绍了4种检测方法(细胞增殖/毒性检测方法大全(上)化学发光法检测)。这次来聊聊其他检测方法。

  其中,荧光检测一般采用细胞外标记染料(如CFSE、BrdU和EdU)或内源性蛋白(如Ki-67)作为指示物,通过荧光显微镜或流式细胞术进行检测。而流式检测则是将染有不同细胞表面标记的细胞样本经过荧光激发后在流式细胞仪中分析,通过对荧光信号的定量测量来确定不同分子标志物在不同时间点和条件下的表达和变化。两种检测方法都可以用于细胞增殖、表观遗传学和细胞周期等方面的研究。

  Brdu:5-溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶的衍生物(类似物),BrdU可代替胸腺嘧啶,随着DNA复制进入子细胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记,可用于标记活细胞中新合成的DNA(细胞活性周期S期)。通过抗BrdU单克隆抗体检测,借此检测细胞的增殖能力,但BrdU单克隆抗体检测过程需要将部分DNA变性,使部分双股解开成单股才能顺利检测。且BrdU为光敏性,因此需要在光线刺激较低(黑暗)的环境下操作,并避光培养。

  EdU原理跟BrdU检测法类似,都是代替胸腺嘧啶(Thymine, T)渗入正在复制的DNA中,并加入能星空体育登录入口 星空体育在线官网与Edu反应的荧光染料,即可利用检测荧光值侦测应用于细胞增殖,或在细胞组织级别作为标记追踪等研究,实验过程不需要经过BrdU检测法的DNA变性处理。

  Calcein-AM:活细胞浆染色,发绿色荧光;P1:死细胞核染色,红色荧光

  在氧化状态下呈现紫蓝色无荧光性,而在细胞增殖旺盛期,还原状态下,转变为呈粉红或红色荧光的还原产物