CRISPR/Cas9文库筛选技术可实现全基因组范围的高通量筛选，其针对每个基因设计3-10条sgRNA，利用芯片一次性合成数万条覆盖整个基因组的sgRNA探针，通过克隆构建载体库，经慢病毒包装后以低感染复数感染宿主细胞，使得理论上每个细胞整合一条sgRNA，构建获得覆盖全基因组的基因敲除细胞池；经过筛选后，提取基因组并针对整合的sgRNA序列进行高通量测序，分析筛选前后sgRNA的丰度变化，进而找出其对应候选基因。
根据 MOI 的测定方法，感染文库病毒，为了确保大多数细胞只被编辑一种基因，选择M0I≤0.3 对应的病毒量感染细胞，并且使得每条 sgRNA 平均有 500 个以上的细胞表达。例如，可成药靶点 CRISPR/Cas9 敲除型文库共有 4652 条 sgRNA，按照 MOI=0.3，sgRNA 覆盖率为 500×，大约需要感染 7.8×10^6 个细胞。
（1）取对数生长期的细胞进行消化，将消化好的细胞用计数仪进行细胞计数，以 1×10^6 个细胞的密度接种到 6 孔板中，接种细胞的同时，计算 MOI=0.3 时需要的文库病毒液，病毒与细胞同时加入孔板中，每孔 2 mL 完全培养基，含 8 µg/mL polybrene，另铺一个不加病毒的作为对照；
胰酶进行消化，在培养箱孵育 3 min 以解离细胞，添加 1 mL 培养基终止消化；
（5）72 h后，未感染病毒的细胞全部死亡，感染病毒的细胞大概有 30%左右，此时给感染病毒的细胞换成新鲜培养液；
（6）扩增细胞，待细胞扩增到一定程度，以文库sgRNA的1000×细胞数进行保种冻存。一部分细胞收细胞团用作day0质控（用于提取基因组，细胞数为文库sgRNA的500×），一部分细胞用作筛选（细胞数为文库sgRNA的500×），筛选分为对照组和实验组，对照组加DMSO，实验组加合适浓度的药物（药物浓度需根据药物IC50曲线或IC80与实际筛选10cm或者15cmdish之间的差异，可以通过预实验进行测试，根据经验大皿中因为细胞数的增加导星空体育登录入口 星空体育在线官网致IC50或IC80浓度改变）。
海星生物一站式CRISPR文库筛选方案—文库质粒、文库病毒、文库扩繁、sgRNA文库定制、CRISPR文库筛选全套定制服务。
我们的服务：CRISPR/Cas9细胞基因编辑、载体构建/病毒包装、分子诊断标准品/突变基因标准品/融合基因标准品、细胞稳转/细胞干扰
我们的产品：HyCyte干细胞/原代细胞/细胞株、三系诱导培养试剂、细胞专用培养基、基因编辑试盒、病毒现货、预筛选胎牛血清
泽连斯基强硬发声：不会承认任何被俄占领的领土属于俄！尚未听到特朗普邀请其访问白宫的消息
央视新闻消息，在当地时间12日举行的新闻发布会上，乌克兰总统泽连斯基称，乌方不会承认任何被俄罗斯占领的领土属于俄罗斯，这是乌方的红线。
3月9日凌晨，河北保定街头，一名外卖小哥在送单途中发现一名醉酒男子倒在路边。小哥立即上前查看，成功唤醒醉酒男子，之后崩溃大哭。
杨铭宇黄焖鸡被曝用顾客吃过的剩菜回收再卖，发酸食材继续用。官方回应：涉事门店永久关闭。#杨铭宇黄焖鸡致歉
【央视首次曝光！歼-20发射新型导弹 “超视距”打掉3架“敌机”】歼-20搭载某新型空空导弹，在超视距空战演习中一次击落3架“敌机”。
战机在训练中失事，他们本有机会逃生，可为避免群众伤亡，他们放弃跳伞，壮烈牺牲。今天是海军烈士任永涛、粘金鑫牺牲六周年，缅怀英雄！#海军烈士任永涛粘金鑫牺牲六周年
突发，俄军已攻入苏贾市中心！刚刚，泽连斯基划红线：不承认任何被占领土属于俄罗斯！停火30天？俄高层消息人士：普京很难同意
据央视新闻报道，当地时间3月12日，乌克兰总统泽连斯基表示，乌克兰总统选举将在冲突结束和解除战时状态后举行，不会有人故意推迟总统选举。
3月10日，据湖南湘潭市中级人民法院消息，百万粉丝网红杨某拒还债务还全国巡演，法院执行局跨省1300公里执行，运用大数据锁定其迈巴赫座驾，1分钟内将其控制。
医院回应“志愿者反映医护偷换新生儿”：涉事医生解聘，护士暂停工作 当地卫健委称将发情况通报
3月12日，红星新闻记者获悉，打拐志愿者上官正义反映:陕西省铜川矿务局中心医院存在医务人员涉嫌合谋转移他人婴儿、伪造病历并成功办理出生医学证明的情况。
近年来，伴随国家安全教育的不断深入，全民维护国家安全意识不断增强，越来越多的快递从业人员能够关注辨别禁寄物品、可疑人员，积极向国家安全机关反映，为及时遏止非法寄递，有效维护国家安全发挥了积极作用。
违规设立“小金库”，攀枝花市第十二中学校原党支部书记、校长胡常波被开除党籍和公职
据西区纪委监委消息：日前，经攀枝花市西区区委批准，西区纪委监委对攀枝花市第十二中学校原党支部书记、校长胡常波严重违纪违法问题进行了立案审查调查。