内标是指在同一反应管中与靶序列共同扩增的一段非靶序列分子。由于在标本采集、核酸提取和PCR反应过程等多个核酸检测实验程序中都存使结果出现假阴性的可能，所以为了更好的避免这种情况，检测试剂往往会设计内对照，也就是我们常说的内标。
内标基因的另一个优点是能够对单个待测样本本身的检测环节进行监测，可作为质控品的有力补充[1]，可作为核酸检测质量的重要指标之一。
内标有星空体育网站 星空体育首页两种形式，一种是使用天然样品中含有的内参基因作为内标，称为内源性内标，另一种是人工添加的内标称为外源性内标[2]，如果内标无扩增曲线，则通常提示实验环节存在问题，该标本实验无效。本案在查看结果时发现有两个样本内标未出，逐一排查多个影响因素后，并最终找到内标未出原因，使内标重出江湖，顺利发出结果。
今年3月11日将乙型肝炎病毒核酸检测在一扩增仪上进行扩增，扩增结束后发现有两个样本内标无Ct值（图1），亦无扩增曲线），而质控品在控，其余标本内标均检出，那这两个样本的内标曲线为何会消失呢？随即开始探秘之旅。
由于我院乙型肝炎病毒核酸检测试剂为乙肝一步法，内标均配制在反应液中，那是否该两孔未加入反应液？随后立即检查其对应的八连管，发现该两个样本所加的反应液在量，色泽上均无异常，因此，排除了试剂原因。
那么样本中是否存在抑制PCR反应的物质？又检查涉案标本，并未发现黄疸，溶血，脂血等异常现象，样本采样管也未用肝素采样管，并查阅病例，也未发现患者使用了特殊的药物，因此，也暂时排除了样本的原因。
难道扩增仪这两个孔荧光捕捉有问题？于是进一步查看该次实验的原始荧光曲线，这次有新的发现，这两个样本内标有原始荧光曲线，只是荧光强度不高（图3），查看其它样本内标荧光扩增曲线），发现该批样本从整体上看，内标荧光强度均不高，这与试剂中加入内标浓度低有关，其中未检出Ct和扩增曲线样本的内标荧光强度最低（图4箭头所指），由此可见，仪器该孔捕捉荧光信号正常，因此，也排除了仪器孔荧光捕捉的问题。这时根据该两标本目标基因原始荧光未有扩增曲线，内标有扩增曲线，暂时可以确定该两个样本结果为阴性。
为进一步寻找原因，于是首先就该情况向试剂厂家工程师询问，试剂工程师又建议向扩增仪器工程师咨询，接着拨通扩增仪厂家工程师电话并详细介绍了有关情况，最终在另一个仪器软件工程师的指导下对仪器“噪音容限”进行了重新设置，由500改为300（图5），重新分析后，扩增曲线），而且多分析出一个低值结果（图7绿色框），遂顺利发出结果。
本次案例由检测样本内标Ct值和扩增曲线未出而对结果的准确性产生怀疑，经过对标本、试剂、操作、仪器等因素的排除，然后查看原始荧光曲线，发现端倪，最后在仪器软件工程师的协助下，查出内标未出为仪器设置的原因，在工程师指导下对仪器“噪音容限”进行重新设置后，最终内标Ct值和扩增曲线得以显现。
本次实验之所以会认为内标基因未出，和我们分子室日常工作习惯也很有关系，一般情况下我们观察的曲线为仪器数据优化处理后的扩增曲线，而非原始荧光曲线。优化处理后的扩增曲线为PCR扩增仪对实时监测到荧光信号进行平滑处理、去除噪声和异常值等操作，通过对这些数据优化处理，可以使得扩增曲线更加平滑、清晰，更容易进行分析和解读，也是曲线]。
其中“噪音容限”设置可去除一些翘尾现象，但同时也会影响对基因检测的灵敏度，实际工作中需要根据检测选择适当的参数。因此，本案例消失的内标曲线并未真正消失，而是由于仪器设置导致低荧光强度的曲线被忽略，最终对仪器参数重新设置后，内标Ct值和扩增曲线都得以显现。
核酸检测结果的准确性受到多种因素的影响，从样本采集到实验条件、实验操作技巧和试剂质量，再到结果分析，每一个环节都可能对最终结果产生显著影响。
为了保证核酸检测结果的准确性，需要在整个检测流程中进行严格的质量控制，严格按规范操作，只有这样，我们才能确保核酸检测结果的准确性和可靠性，为疾病的诊断和治疗提供有力的支持。
其中内标基因的扩增情况对实验最终的结果判读具有重要星空体育网站 星空体育首页参考价值，在查看目标基因扩增情况同时要看内标基因的是否正常扩增，当内标出现异常结果时需要细心观察、耐心分析，查找原因。
本案例通过查看内标基因原始荧光扩增曲线，最终找到内标Ct值和扩增曲线未出的原因为扩增仪对数据优化处理的结果，通过参数的重新设置使问题迎刃而解，这也提示我们在日常工作中应了解检验各个项目的检测原理和干扰因素，对异常的检验结果，不能单纯依赖仪器，重视原始数据的查看。
本案例由于部分样本内标结果未出，然后从影响核酸检测的多因素逐一分析，拨云见日，最终通过调试仪器参数而解决问题。核酸检测的结果的准确性需要多环节的质量保证，在日常工作中，从样本处理到仪器操作，每一步都需按规范进行，查看结果时，应重视原始数据的查看，同时，应加强对检测原理和干扰因素的认识，对仪器工作原理和参数设置的了解也必不可少。
[1]陈少彬,何子毅,陈庆恺,等.血液筛查核酸检测内标在系统评价的应用分析[J].中国输血杂志,2016,29(2):201-203.
[2]欧铜,张兵,张秀明.对新型冠状病毒实验室检测技术合理应用的再认识[J].检验医学,2022,37(4):303-308.
[3]侯红渠,邓玉林,樊云龙,等.便携式实时荧光定量PCR仪数据处理方法研究[J].生命科学仪器,2023,21(5):1-7.
说明：本文为原创投稿，不代表检验医学新媒体观点。转载时请注明来源及原创作者姓名和单位。
特别声明：以上内容(如有图片或视频亦包括在内)为自媒体平台“网易号”用户上传并发布，本平台仅提供信息存储服务。
上海一新小区隔壁是污染地块，报告称“土壤中有18种化学物质”！单价达7万元，业主：若知情，三四万元都不会买
关键4罚1中被绝杀：浓眉39+9让7连胜从手中溜走 距MVP还差大心脏
火影 T6A 笔记本配置上新：R7-7435H+24G+1T+4070 售 6399 元
小米 REDMI Watch 5 智能手表支持焦点通知、控车控家等功能
因存在起火风险，贝尔金宣布召回 BoostCharge Pro 移动电源