4.细胞中表达有GFP,Apollo染色后检测不到GFP的荧光信号。 1)染色后洗涤不充分。 1加入Apollo染色反应液,避光、室温孵育10分钟后离心,吸弃染色反应液; 4加入渗透剂(0.5%TritonX-100的PBS)室温解育10min,离心,细胞固定化吸弃上清,PBS清洗1次. 2.整个细胞都有EdU信号,或背景信号很强。 Apollo染色 吸弃上清 对比及特点 实验中的Q&A 3.没有阳性信号。 3)对于阴性结果,可设置阳性对照以确认染色过程无误。 2)染色过程干片等因素导致未染上信号。 5)图像获取及分析 1.什么样的信号才是真正的EdU阳性信号? 4)没有阳性信号而曝光过度导致背景严重。 4)染色 1)EdU处理时间太短导致没有阳性信号, Apollo染料会造成GFP的失活,故Apollo染色后无法直接检测GFP. 2)一般部分细胞上的信号呈现上述特征,而不是全部细胞。 1)Apollo染色信号与核染色信号完全重合,或者与核重合的信号明显强于胞浆上的信号(染料附着等) 24%多聚甲固定15~30min后,离心,用枪头吸弃上清: 3加入甘氨酸中和5min,离心,吸弃上清,PBS清洗1次,离心,吸弃上清; 3)固定细胞 3PBS清洗细胞: BrdU与EdU检测优缺点综合比较:1、更准确2、更简单3、更灵敏星空体育 星空体育平台4、更快速5、更兼容 1将细胞收集至流式管中,离心,用枪头吸弃上清; 2加入渗透剂(0.5%TritonX-100的PBS)室温清洗2~3次,离心吸弃上清,加PBS重悬; 2)染色过程中干片,导致染料粘附严重。 3)多聚甲醛固定时间过长而未使用甘氨酸中和。
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