1、间充质干细胞(msc)是能够分化成不同类型的各种细胞，诸如骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞、肌细胞、上皮细胞、肝细胞或神经元的细胞。这些多能细胞正被临床研究作为用于治疗多种人类疾病的治疗剂。由于msc允许自体移植，所以它们是一种非常适合于细胞和/或基因疗法以及用于再生医学应用的细胞类型。msc的免疫学特性，诸如抗炎、免疫调节和免疫抑制能力，有助于它们作为免疫耐受剂的潜在作用。
2、msc存在于包括骨髓、脂肪、滑膜和脐带血在内的几乎所有组织中，并且容易从这些组织中提取。用于从各种人和动物组织和器官中提取、分离和鉴定msc的方法在文献中有很好的记载。还描述了用于多能msc的生长和维持以及用于培养物中msc的多谱系分化的培养基和条件。
3、用于在培养物中生长msc的当前方法需要在培养基中存在血清和/或存在涂覆细胞培养表面的细胞外基质蛋白。一些方法还需要在覆盖培养生长表面的饲养细胞层上培养msc。饲养细胞、血清和细胞外基质蛋白通常是不明确的细胞培养试剂，因此不能用于生产细胞治疗产品或药剂。血清和/或细胞外基质涂层的使用也增加了成本，并且在细胞培养和生产工作流程中引入了可变性。仍然需要用于在培养物中扩增msc，特别是获得适用于各种治疗应用的msc群体的方法和试星空体育登录入口 星空体育在线官网剂。
1、本技术整体涉及用于扩增间充质干细胞的方法和组合物。在各方面，本技术涉及用于在培养基中并在表面上不具有饲养细胞层或细胞粘附涂层的改性培养表面上扩增间充质干细胞的方法和组合物。在实施方案中，方法包括在无血清培养基中并在表面上不具有饲养细胞层或细胞粘附涂层的改性培养表面上扩增间充质干细胞群体。
2、在一个方面，本文提供了一种扩增间充质干细胞群的方法，该方法包括：(i)获得多个间充质干细胞(msc)；以及(ii)在生长培养基中在表面上培养msc，其中该表面缺乏细胞粘附涂层并且缺乏饲养细胞层；从而产生扩增的msc群体。在实施方案中，生长培养基是无血清的。在实施方案中，生长培养基是无动物来源成分培养基和/或无异种成分培养基。
3、在实施方案中，表面含有至少约0.9％的n，具有大于或等于19.0％的o和n的总和并且具有至少约14度的静态固着接触角。在实施方案中，表面含有约0.9％至约3.2％的n，具有约19％至约35％的o和n的总和并且具有约14度至约65度的固着接触角。在实施方案中，表面含有至少约0.9％的n，具有大于或等于19.0％的o和n的总和并且具有至少约14度的静态固着接触角。在实施方案中，表面含有约0.9％至约3.2％的n，具有约19％至约35％的o和n的总和并且具有约14度至约60度的固着接触角。在实施方案中，表面含有约1.3％至约2.8％的n，具有约22％至约29％的o和n的总和并且具有约17度至约55度的固着接触角。
4、在实施方案中，使用等离子体处理对表面进行改性。在实施方案中，表面包括聚苯乙烯、环烯烃聚合物、环烯烃共聚物、聚烯烃、聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯、苯乙烯丙烯腈共聚物以及它们的混合物和共聚物。在实施方案中，表面是容器或基质的一部分。
5、在实施方案中，msc分离自骨髓、脂肪组织、真皮、胎盘、脐带、羊水、滑液、滑膜、乳牙或骨骼肌。在实施方案中，msc是人msc、非人灵长类动物msc、鼠msc、大鼠msc、猪msc、山羊msc或绵羊msc。
6、在实施方案中，培养msc包括使msc在生长培养基中在表面上生长至少3代。在实施方案中，培养msc包括使msc在生长培养基中在表面上生长至少6代。
7、在实施方案中，在允许msc分化的条件下孵育所扩增的msc群体。在实施方案中，在允许msc分化成选自由成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞组成的组的细胞的条件下孵育所扩增的msc群体。
8、在一个方面，本文提供了一种用于编辑msc的基因组的方法，该方法包括：(i)获得使用本文提供的扩增方法扩增的msc；以及(ii)编辑msc的基因组。在实施方案中，基因组是使用选自以下中的一种或多种基因组编辑试剂编辑的：锌指核酸酶(zfn)、转录激活因子样效应物核酸酶(talen)、大范围核酸酶和规律成簇间隔短回文重复(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeat，crispr)相关蛋白。
9、在一个方面，本文提供了一种治疗需要疗法的受试者的方法，该方法包括：(i)获得多个间充质干细胞(msc)；(ii)在无血清生长培养基中在表面上扩增msc，其中该表面缺乏细胞粘附涂层并且缺乏饲养细胞层；以及(iii)将所扩增的msc转移至受试者，从而治疗该受试者。在实施方案中，表面含有至少约0.9％的n，具有大于或等于19％的o和n的总和并且具有至少约14度的静态固着接触角。在实施方案中，多个msc来源于受试者。在实施方案中，方法进一步包括在将msc转移至受试者之前对所扩增的msc进行基因修饰。
10、在一个方面，本文提供了一种用于提高间充质干细胞(msc)群体的移植潜力的方法，该方法包括：(i)获得多个间充质干细胞(msc)；以及(ii)在无血清生长培养基中在含有至少约0.9％的n、大于或等于19％的o和n的总和并且具有至少约14度的静态固着接触角的表面上扩增msc，其中该表面缺乏细胞粘附涂层并且缺乏饲养细胞层；从而改善msc群体的移植潜力。
11、在一个方面，本文提供了根据本文提供的msc扩增方法产生的扩增的msc群体用于制备药剂的用途。
12、在一个方面，本文提供了使用本文提供的msc扩增方法扩增的间充质干细胞(msc)群体，该msc群体用于治疗受试者的药剂中。在实施方案中，msc在扩增之前来源于待治疗受试者。在实施方案中，所扩增群体的msc是基因修饰的。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述表面含有至少约0.9％的n，具有大于或等于19.0％的o和n的总和并且具有至少约14度的静态固着接触角。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述表面含有约0.9％至约3.2％的n，具有约19％至约35％的o和n的总和并且具有约14度至约65度的固着接触角。
4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述表面含有约1.3％至约2.8％的n，具有约22％至约29％的o和n的总和并且具有约17度至约55度的固着接触角。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述生长培养基是无血清的。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述生长培养基是无动物来源成分培养基和/或无异种成分培养基。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述msc分离自骨髓、脂肪组织、真皮、胎盘、脐带、羊水、滑液、滑膜、乳牙或骨骼肌。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述msc是人msc、非人灵长类动物msc、鼠msc、大鼠msc、猪msc、山羊msc或绵羊msc。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，在(ii)的所述培养之前，在包含粘附涂层的培养容器中在培养容器表面上培育所述多个msc。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，所述培养包括使所述msc在生长培养基中在所述表面上生长至少3代。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，所述培养包括使所述msc在生长培养基中在所述表面上生长至少6代。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，使用等离子体处理对所述表面进行改性。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中，所述表面包括聚苯乙烯、环烯烃聚合物、环烯烃共聚物、聚烯烃、聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯、苯乙烯丙烯腈共聚物以及它们的混合物和共聚物。
16.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中，所述表面包括等离子体处理的聚苯乙烯。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中，所述表面是容器或基质的一部分。
18.一种使根据权利要求1至17中任一项所述的方法扩增的间充质干细胞分化的方法，所述方法包括在允许所述细胞分化的条件下孵育所扩增的msc群体。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，在允许所述细胞分化成选自由成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞组成的组的细胞的条件下培养所扩增的msc群体。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述基因组是使用选自以下中的一种或多种基因组编辑试剂编辑的：锌指核酸酶(zfn)、转录激活因子样效应物核酸酶(talen)、大范围核酸酶和规律成簇间隔短回文重复(crispr)相关蛋白。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述表面含有至少约0.9％的n，具有大于或等于19％的o和n的总和并且具有至少约14度的静态固着接触角。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述表面含有约0.9％至约3.2％的n，具有约19％至约35％的o和n的总和并且具有约14度至约65度的固着接触角。
25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述表面含有约1.3％至约2.8％的n，具有约22％至约29％的o和n的总和并且具有约17度至约55度的固着接触角。
26.根据星空体育登录入口 星空体育在线官网权利要求22至25中任一项所述的方法，其中，所述多个msc来源于所述受试者。
27.根据权利要求22至26中任一项所述的方法，所述方法进一步包括在将所述msc转移至所述受试者之前对所述msc进行基因修饰。
29.一种用于改善间充质干细胞(msc)群体的移植潜力的方法，所述方法包括：
30.根据权利要求29所述的方法，其中，所述表面含有约0.9％至约3.2％的n，具有约19％至约35％的o和n的总和并且具有约14度至约65度的固着接触角。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，所述表面含有约1.3％至约2.8％的n，具有约22％至约29％的o和n的总和并且具有约17度至约55度的固着接触角。
32.根据权利要求1至17中任一项所述的方法产生的扩增的msc群体用于制备药剂的用途。
33.一种使用根据权利要求1至17中任一项所述的方法扩增的间充质干细胞(msc)群体，所述msc群体用于治疗受试者的药剂中。
34.根据权利要求33所述的msc群体，其中，所述msc在扩增之前来源于待治疗的所述受试者。
35.根据权利要求33或权利要求34所述的msc群体，其中，所述msc是基因修饰的。
本技术整体涉及用于在培养物中在改性表面上扩增间充质干细胞的方法和组合物，在该改性表面上不存在饲养细胞层并且不存在细胞粘附涂层。在一些情况下，这些间充质干细胞在无血清培养基中在该改性表面上扩增。
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