星空平台(中国)官方网站

qPCR中CT值的那些事-星空体育官方网站
星空体育官方网站
qPCR中CT值的那些事
发布:2024-09-23 05:10:28 浏览:

  Ct值是荧光定量PCR重要的结果呈现形式,它被用于计算基因表达量差异或者基因拷贝数。那么荧光定量的Ct值多大被认为是合理?如何保证Ct值的有效范围呢?

  也称循环阈值,C代表Cycle,t代表threshold。其含义是:在PCR 循环过程中,荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数。

  1)Ct值的重现性,PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。

  2)Ct值与起始模板的线性关系,由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用标准曲线定量的方法。

  Ct值的范围为15-35,Ct值小于15,认为扩增在基线期范围内,未达到荧光阈值。理想情况下,Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系,也就是标准曲线。通过标准曲线%时,计算出基因单个拷贝数定量的Ct值在35左右,若大于35,理论上模板起始拷贝数小于1,可认为无意义。

  对于星空体育登录入口 星空体育在线官网不同的基因Ct范围,因起始模板量中基因拷贝数和扩增效率不同,需做出该基因的标准曲线,计算出基因的线性检测范围。

  由扩增循环数和产物量之间的关系:扩增星空体育登录入口 星空体育在线官网产物量=起始模板量×(1+En)循环个数,可以看出,在理想条件下,起始模板量和En(扩增效率)会对Ct值产生影响。模板质量或者扩增效率的差异会造成Ct值偏大或过小。

  五大连池市文体广电和旅游局220.81万元采购照度计,甲醛分析仪,VOC检测仪

  9大主题!60+大咖!9月21-22日.深圳.合成生物学与生物制造应用大会!

  喜大普奔 |Nio™ 数字PCR一体机系列荣获2024 reddot设计奖

  展会邀请-艾普拜生物邀请您参加2024 IVD China体外诊断创新展

  快速荧光定量PCR扩增酶预混液(UNG, 2×)让qPCR实验so easy

  多重数字PCR活菌检测:naica®数字PCR系统助力霍乱弧菌活菌绝对定量

  邀请函中国海洋湖沼学会水环境分会、中国环境科学学会海洋环境保护专业委员会2023年学术年会

  Drop-off-数字PCR方法快速检测和定量废水中新冠病毒及变种VOCs